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谁知道

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么跑出的RNA电泳图只有一条带,而且很亮?已有9人参与

我用trizo法提取的细菌RNA,分光光度计检测其浓度为100ng/微升,260/280为1.9 , 260/230为2.25l ,可为什么跑出的RNA电泳图只有一条带,而且很亮呢?
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

对,但是也错

引用回帖:
Originally posted by DNAhelix at 2010-04-07 12:19:22:


一般到逆转才用到引物,那么它的产物是cDNA.
并非在RNA阶段!
退一步来说,即使他提取的是单一的mRNA,也不可能跑出一条亮带!

对于cDNA克隆来讲:要是很纯的模板,条带是单一的,要是有两条带就只能说明有较多的杂质。不信你下次做实验掺杂一点试试看。
要是一种细胞或组织的总mRNA,你用来检测目的就是想知道有没有,条带也是单一的,这跟你 制胶有关。你用大孔的,自然跑的时候速率差不多一样快,怎么区分,所以说我们不用来区分它们,我们只要知道有没有就行了。要是还有一条微微的带,那不要紧,肯定有小分子的RNA了,你分析的时候说明就是了。整个楼层就是我跟楼主讨论了。不过楼主打破沙锅问到底的精神很好啊。我还是那句话,拿到以前的老文章,肯定会有相关知识,现在的文章都不提了,因为这是很间的事情大家都不在乎。但也要有证据证明你的RNA存在。
17楼2010-04-07 12:30:20
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DNAhelix

银虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-07 08:12
当时提取真核细胞RNA时,有三条带,28s/18s约为2:1.
原核也应该有三条带吧。

是不是没提取好?那一条亮带大概在什么位置?如果在加样孔旁会不会是蛋白污染?
智慧活法:不生气,不计较!
2楼2010-04-06 22:42:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
无图无真相~~~
跟marker比大概是哪个位置?
3楼2010-04-06 23:29:30
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

图片呢?

★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 2010-04-07 08:13
晕,没有图片大家怎么帮你分析。把图片传上来吧。我做的一般是两条带,因为mRNA和另外两个RNA的碱基数相差很大,所以会分成两条带,要是跑胶的时间长,胶制作的密一点,应该会跑出三条带。你下次跑的时间长点。同时也跟提取方法有关,要是你的方法只是提取mRNA 那就只能跑出一条带了。对伐!
4楼2010-04-06 23:54:27
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