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xiongzai08

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于葡萄糖标准曲线的制备 已有5人参与

我最近在用做葡萄糖的标准曲线,已经做了三遍了,硬是没做出来,我的方法是:配好0.5mg/ml的葡萄糖标准溶液,分别取20μl、40μl、80μl、120μl、160μl、200μl于10ml的容量瓶中,加入5%苯酚溶液1ml,混匀,迅速加浓硫酸7ml,摇匀,定容,置于40度的水浴中保温30分钟,去除后置于冰水浴中5分钟。经过紫外扫描后,发现对照品中前三个的吸收值是负值,我是用了空白建立基线的,不知道为什么。还有就是所有对照品加浓硫酸时会很烫,不知道对检查有没有影响,当加完硫酸后用水定容时溶液的颜色都会从绿色变为黑色,发热同样很严重,我个人认为这个地方出了问题,请各位做了葡萄糖标准曲线的高手给个合理的解释,小弟感激不尽。
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ddw888

金虫 (小有名气)

好好检查一下你的苯酚试液
5楼2010-04-08 17:40:32
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ditiandi

铜虫 (初入文坛)

注意的小问题


karl2100(金币+1):谢谢指教! 2010-04-07 00:00
xiongzai08(金币+3): 2010-04-07 09:26
第一:你先可以定容,因为后面的加苯酚和浓硫酸是一定的。最好不要用你反应的仪器的刻度来定容。
第二:反应仪器一定要洗干净,最好用酸洗液洗过,不知你用塞子不?如用就不要塑料棉塞等跟浓硫酸有反应的产生碳化的。
第三:关于加浓硫酸产热是很正常的,但你可以在加入后放在冰水浴中以减小其误差。
这是我最近做的时候得到的几点,希望你对你有帮助。而且反应后的颜色不是黑色的。
2楼2010-04-06 21:54:56
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chenjiajiang198

至尊木虫 (著名写手)

迅速加浓硫酸7ml?????
朋友 不应该是迅速哈 应该是在冰水浴中边摇边滴加硫酸 不然会使糖类成分糊化
3楼2010-04-06 22:49:44
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xiongzai08

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ditiandi at 2010-04-06 21:54:56:
第一:你先可以定容,因为后面的加苯酚和浓硫酸是一定的。最好不要用你反应的仪器的刻度来定容。
第二:反应仪器一定要洗干净,最好用酸洗液洗过,不知你用塞子不?如用就不要塑料棉塞等跟浓硫酸有反应的产生碳化 ...

朋友,我对你的回答中的第一点很感兴趣,我的对照品加完苯酚和硫酸之后是绿色的(我感觉是,可能因人而异吧),等我加水定容至刻度时,摇匀发现颜色就会变黑,散热很大,是不是因为碳化的原因呢呢?
还有一点,你说让我先定容再加苯酚和硫酸,那溶度岂不是变小了,做标曲的时候拿怎么办啊?
谢谢
4楼2010-04-07 09:25:57
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