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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】农杆菌介导的遗传转化问题请教，急！
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jianhuafly

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】农杆菌介导的遗传转化问题请教，急！ 已有2人参与

本人做的农杆菌转化木本果树胚状体试验。
一般情况下，随着侵染时间的增加，GUS瞬时表达率会呈低-高-低。
我设置了4个时间梯度，15min,30min,45min,60min。在15min的时候比30min时GUS瞬时表达率要高，45min时GUS表达率最高，请问前者该如何解释啊？
老师说可能要从菌的生长特性来考虑。
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1楼 2010-04-05 02:14:33
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jianhuafly

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 虫虫博士 at 2010-04-05 08:20:21:
一般情况10-15分钟是最好的，可以保证转基因的阳性率了，没大必要在第一步费时间。

因为我的受体是木本果树，时间短了可能不够啊
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4楼2010-04-05 11:31:24
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虫虫博士

新虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-05 08:38
jianhuafly(金币+1):谢谢！ 2010-04-05 11:30
感觉你试验设计的不够合理，4个时间梯度来就看侵染效率曲线不能反映真实情况，你可以从侵染5分钟开始，间隔5分钟，到60分钟做散点，看看会怎么样？
另外取样的农杆菌也一定要控制好OD值，保证不要摇过了。
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2楼2010-04-05 08:18:37
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虫虫博士

新虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-05 08:39
jianhuafly(金币+1):谢谢！ 2010-04-05 11:30
一般情况10-15分钟是最好的，可以保证转基因的阳性率了，没大必要在第一步费时间。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-04-05 08:20:21
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