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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA侧翼序列的扩增
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 heying714 的 9 个金币

heying714

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA侧翼序列的扩增

本人需要得到一株野生节杆菌的一个酶基因，大概1200bp。根据保守序列设计引物已得到760bp的片段，需要向两端步移以得到全长基因。
经过比较，初步决定从TaKaRa的Genome Walking Kit和LA PCR™ in vitro Cloning Kit 中选一种。前者操作简单，但不知效率能否保证。后者在酶切、连接上可能需要花工夫。
请教高人，哪种较好？有哪些注意事项？还是有其它更好的方法？
不胜感激！
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1楼 2010-03-31 12:41:11
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
heying714(金币+1): 2010-03-31 16:58
我感觉你这个用RACE的方法也很好，你考虑一下
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2楼2010-03-31 16:36:18
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heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-31 16:36:18:
我感觉你这个用RACE的方法也很好，你考虑一下

可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！
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3楼2010-03-31 16:58:16
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
heying714(金币+1): 2010-03-31 19:02
Genome Walking Kit效果较好，我们实验室有人就用的这个
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4楼2010-03-31 17:54:46
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heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by diaoyuhua at 2010-03-31 17:54:46:
Genome Walking Kit效果较好，我们实验室有人就用的这个

这个试剂盒有四个简并引物，会不会出现四个都没效果的情况呢？
追问一下，这个试剂盒对模板即基因组DNA的纯度要求高吗？
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5楼2010-03-31 19:05:42
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cato8163

银虫 (正式写手)
heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！

用RACE很快，因为你有了中间片段。我想你用RACE，两周就差不多拿到全长了。我也用过，步移，TAKARA的。但觉得，肯定不如RACE好、快。钱是老板考虑的。
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6楼2010-04-01 09:25:15
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！

不觉得RACE难，本人三个月，拿到七个基因在两个种中的全长，多设计几个引物，没有做不出来这一说
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7楼2010-04-01 10:53:31
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