应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA侧翼序列的扩增
71/1返回列表
查看: 857  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 heying714 的 9 个金币

heying714

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA侧翼序列的扩增

本人需要得到一株野生节杆菌的一个酶基因，大概1200bp。根据保守序列设计引物已得到760bp的片段，需要向两端步移以得到全长基因。
经过比较，初步决定从TaKaRa的Genome Walking Kit和LA PCR™ in vitro Cloning Kit 中选一种。前者操作简单，但不知效率能否保证。后者在酶切、连接上可能需要花工夫。
请教高人，哪种较好？有哪些注意事项？还是有其它更好的方法？
不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-31 12:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
heying714(金币+1): 2010-03-31 16:58
我感觉你这个用RACE的方法也很好，你考虑一下
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-31 16:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-31 16:36:18:
我感觉你这个用RACE的方法也很好，你考虑一下

可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-31 16:58:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diaoyuhua

金虫 (小有名气)
heying714(金币+1): 2010-03-31 19:02
Genome Walking Kit效果较好，我们实验室有人就用的这个
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-31 17:54:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by diaoyuhua at 2010-03-31 17:54:46:
Genome Walking Kit效果较好，我们实验室有人就用的这个

这个试剂盒有四个简并引物，会不会出现四个都没效果的情况呢？
追问一下，这个试剂盒对模板即基因组DNA的纯度要求高吗？
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-31 19:05:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cato8163

银虫 (正式写手)
heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！

用RACE很快，因为你有了中间片段。我想你用RACE，两周就差不多拿到全长了。我也用过，步移，TAKARA的。但觉得，肯定不如RACE好、快。钱是老板考虑的。
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-01 09:25:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！

不觉得RACE难，本人三个月，拿到七个基因在两个种中的全长，多设计几个引物，没有做不出来这一说
赞一下 回复此楼
7楼2010-04-01 10:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 heying714 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-11 01:49 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 01:26 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:21 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:13 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:10 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 5/250 2026-11-11 01:04 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:02 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 00:59 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 5/250 2026-11-10 19:45 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 19:39 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭