应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA侧翼序列的扩增
71/1返回列表
查看: 688  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 heying714 的 9 个金币

heying714

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA侧翼序列的扩增

本人需要得到一株野生节杆菌的一个酶基因，大概1200bp。根据保守序列设计引物已得到760bp的片段，需要向两端步移以得到全长基因。
经过比较，初步决定从TaKaRa的Genome Walking Kit和LA PCR™ in vitro Cloning Kit 中选一种。前者操作简单，但不知效率能否保证。后者在酶切、连接上可能需要花工夫。
请教高人，哪种较好？有哪些注意事项？还是有其它更好的方法？
不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-31 12:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
heying714(金币+1): 2010-03-31 16:58
我感觉你这个用RACE的方法也很好，你考虑一下
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-31 16:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-31 16:36:18:
我感觉你这个用RACE的方法也很好，你考虑一下

可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-31 16:58:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diaoyuhua

金虫 (小有名气)
heying714(金币+1): 2010-03-31 19:02
Genome Walking Kit效果较好，我们实验室有人就用的这个
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-31 17:54:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heying714

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by diaoyuhua at 2010-03-31 17:54:46:
Genome Walking Kit效果较好，我们实验室有人就用的这个

这个试剂盒有四个简并引物，会不会出现四个都没效果的情况呢？
追问一下，这个试剂盒对模板即基因组DNA的纯度要求高吗？
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-31 19:05:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cato8163

银虫 (正式写手)
heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！

用RACE很快，因为你有了中间片段。我想你用RACE，两周就差不多拿到全长了。我也用过，步移，TAKARA的。但觉得，肯定不如RACE好、快。钱是老板考虑的。
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-01 09:25:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话，两端得分别用试剂盒，比上面两试剂盒都贵，而且做起来也不简单，还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢！

不觉得RACE难，本人三个月，拿到七个基因在两个种中的全长，多设计几个引物，没有做不出来这一说
赞一下 回复此楼
7楼2010-04-01 10:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 heying714 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +5 玛卡巴卡boom 2026-04-11 5/250 2026-04-11 16:18 by 闲人终南山
[考研] 305求调剂 +5 77Qi 2026-04-07 5/250 2026-04-11 11:45 by zhq0425
[考研] 调剂 +9 只叙离别辞 2026-04-09 11/550 2026-04-11 10:42 by zhq0425
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 材料085601调剂 +25 何润采123 2026-04-10 27/1350 2026-04-10 23:17 by Ftglcn90
[考研] 0703调剂 +19 拾玖壹 2026-04-04 22/1100 2026-04-10 22:16 by bljnqdcc
[考研] 一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 08工学 309分求调剂 +6 Yin DY 2026-04-08 6/300 2026-04-10 09:18 by Delta2012
[考研] 生物与医药273求调剂 +18 荔题南墙 2026-04-05 19/950 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 308求调剂 +21 倘若起风了呢 2026-04-05 21/1050 2026-04-10 08:13 by Sammy2
[考研] 考研调剂-材料类-284 +28 想换手机不想解� 2026-04-08 28/1400 2026-04-09 20:08 by 倒数321?
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 307分材料专业求调剂 +12 Hll胡 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:33 by luoyongfeng
[考研] 一志愿吉大化学327求调剂 +12 王王白石 2026-04-06 13/650 2026-04-08 16:05 by luoyongfeng
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭