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heying714

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA侧翼序列的扩增

本人需要得到一株野生节杆菌的一个酶基因,大概1200bp。根据保守序列设计引物已得到760bp的片段,需要向两端步移以得到全长基因。
经过比较,初步决定从TaKaRa的Genome Walking Kit和LA PCR™ in vitro Cloning Kit 中选一种。前者操作简单,但不知效率能否保证。后者在酶切、连接上可能需要花工夫。
请教高人,哪种较好?有哪些注意事项?还是有其它更好的方法?
不胜感激!
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

heying714(金币+1): 2010-03-31 16:58
我感觉你这个用RACE的方法也很好,你考虑一下
2楼2010-03-31 16:36:18
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heying714

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-31 16:36:18:
我感觉你这个用RACE的方法也很好,你考虑一下

可是用RACE的话,两端得分别用试剂盒,比上面两试剂盒都贵,而且做起来也不简单,还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢!
3楼2010-03-31 16:58:16
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)

heying714(金币+1): 2010-03-31 19:02
Genome Walking Kit效果较好,我们实验室有人就用的这个
4楼2010-03-31 17:54:46
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heying714

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by diaoyuhua at 2010-03-31 17:54:46:
Genome Walking Kit效果较好,我们实验室有人就用的这个

这个试剂盒有四个简并引物,会不会出现四个都没效果的情况呢?
追问一下,这个试剂盒对模板即基因组DNA的纯度要求高吗?
5楼2010-03-31 19:05:42
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cato8163

银虫 (正式写手)

heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话,两端得分别用试剂盒,比上面两试剂盒都贵,而且做起来也不简单,还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢!

用RACE很快,因为你有了中间片段。我想你用RACE,两周就差不多拿到全长了。我也用过,步移,TAKARA的。但觉得,肯定不如RACE好、快。钱是老板考虑的。
6楼2010-04-01 09:25:15
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

heying714(金币+2): 2010-04-01 13:11
引用回帖:
Originally posted by heying714 at 2010-03-31 16:58:16:


可是用RACE的话,两端得分别用试剂盒,比上面两试剂盒都贵,而且做起来也不简单,还得反转录。貌似好多人做很长时间都没啥结果。
谢谢!

不觉得RACE难,本人三个月,拿到七个基因在两个种中的全长,多设计几个引物,没有做不出来这一说
7楼2010-04-01 10:53:31
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