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anny66cb

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计,急,求助

老板让克隆葡萄中一个酶的基因,这个酶的基因就只在葡萄一个其他品种中有人克隆出来了,我根据它的序列设计了很多引物,但PCR都没有结果,我该怎么办呀? 昨天还被老板骂了,希望大家指点,帮帮小妹
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anny66cb

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-31 16:45:54:
首先,我认为如果都是葡萄,那么酶基因不会差异太大,使用RACE的方法一定可以做出全长。甚至我觉得不需要设计简并引物,直接设计就可以。关键是楼主到底是怎么做的?所谓的不出带,是什么实验的结果?

我要做的品种是赤霞珠,引物是根据黑比诺的中该酶的基因序列设计的,但总是没有结果,有时只有引物二聚体,我该怎么样做呢?如果是引物的问题,我该怎么设计呢
5楼2010-03-31 18:24:12
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yet

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
第一如果这个基因有种属的特异性,P不出来很正常,因为你的基因组中就没有嘛
第二可以优化一下PCR反应体系,反应程序。而且PCR的酶也很重要,Taq酶与Pfu酶都可以尝试一下
2楼2010-03-31 09:58:29
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anny66cb

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yet at 2010-03-31 09:58:29:
第一如果这个基因有种属的特异性,P不出来很正常,因为你的基因组中就没有嘛
第二可以优化一下PCR反应体系,反应程序。而且PCR的酶也很重要,Taq酶与Pfu酶都可以尝试一下

反应体系我都试过了, 如果是第一原因,我再该怎么去设计引物呢
3楼2010-03-31 10:00:05
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先,我认为如果都是葡萄,那么酶基因不会差异太大,使用RACE的方法一定可以做出全长。甚至我觉得不需要设计简并引物,直接设计就可以。关键是楼主到底是怎么做的?所谓的不出带,是什么实验的结果?
4楼2010-03-31 16:45:54
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