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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR引物设计，急，求助
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anny66cb

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计，急，求助

老板让克隆葡萄中一个酶的基因，这个酶的基因就只在葡萄一个其他品种中有人克隆出来了，我根据它的序列设计了很多引物，但PCR都没有结果，我该怎么办呀？ 昨天还被老板骂了，希望大家指点，帮帮小妹
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1楼 2010-03-31 09:50:06
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先，我认为如果都是葡萄，那么酶基因不会差异太大，使用RACE的方法一定可以做出全长。甚至我觉得不需要设计简并引物，直接设计就可以。关键是楼主到底是怎么做的？所谓的不出带，是什么实验的结果？
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4楼2010-03-31 16:45:54
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yet

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一如果这个基因有种属的特异性，P不出来很正常，因为你的基因组中就没有嘛
第二可以优化一下PCR反应体系，反应程序。而且PCR的酶也很重要，Taq酶与Pfu酶都可以尝试一下
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2楼2010-03-31 09:58:29
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anny66cb

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yet at 2010-03-31 09:58:29:
第一如果这个基因有种属的特异性，P不出来很正常，因为你的基因组中就没有嘛
第二可以优化一下PCR反应体系，反应程序。而且PCR的酶也很重要，Taq酶与Pfu酶都可以尝试一下

反应体系我都试过了， 如果是第一原因，我再该怎么去设计引物呢
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3楼2010-03-31 10:00:05
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anny66cb

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-31 16:45:54:
首先，我认为如果都是葡萄，那么酶基因不会差异太大，使用RACE的方法一定可以做出全长。甚至我觉得不需要设计简并引物，直接设计就可以。关键是楼主到底是怎么做的？所谓的不出带，是什么实验的结果？

我要做的品种是赤霞珠，引物是根据黑比诺的中该酶的基因序列设计的，但总是没有结果，有时只有引物二聚体，我该怎么样做呢？如果是引物的问题，我该怎么设计呢
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5楼2010-03-31 18:24:12
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