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铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒转化农杆菌之诡异现象?有图为证!

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最近用质粒转化农杆菌LBA4404,热击法转化,涂平板,挑单菌落于小EP管内1mLYEB液体培养基抗生素Amp载体抗性和rif,220rpm过夜,第二天PCR检测(20ul体系加1-5ul菌液)有一管P出来有条带,不到800bp的片段如下图那个亮条带。然后扩摇,接种50ul于10-50mL液体YEB中,加抗生素Amp和rif (都是新配的),扩摇后(同样的体系加同样的菌液)PCR检测就没有了?!做了三次转化每次都有一小单菌落有,但是扩摇就没有了,接连三次都是这种很奇怪的结果。额滴神啊!谁能给我解释解释?怎样才能扩摇出来


[ Last edited by yet on 2010-3-31 at 09:50 ]
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zhongy1985

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵,这现象我也是第一次见,楼主有条件的话可测序验证下。
3楼2010-03-31 22:48:03
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

这个现象我也遇到过,建议提取农杆菌的质粒后来做PCR检测
2楼2010-03-31 20:48:33
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