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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 质粒DNA提取溶液1、2、3的作用?

如题,质粒提取溶液1、2、3的作用分别是什么?请高人指教。

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花落人亡两不知
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j2

木虫 (正式写手)

liuyuxue(金币+2): 2010-03-27 11:03
溶液1是重悬菌液的
溶液2是裂解菌体的
溶液3是沉淀基因组DNA的
修炼ing,当虫仙……
2楼2010-03-27 10:31:24
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fandyu

金虫 (正式写手)

希望对你有作用

liuyuxue(金币+2): 2010-03-27 11:03
溶液1   50mM 葡萄糖 / 10mM EDTA / 25mM Tris-HCl,pH=8.0
葡萄糖增稠,使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部;EDTA 抑制DNase的活性。这一步溶液中还可以加入RNase,不受EDTA影响,并且可以在后续步骤中被除去。

溶液2  0.2M NaOH / 1% SDS
破细胞的主要是碱,而不是SDS,所以才叫碱法抽提。

溶液3   3M 醋酸钾 / 2M 醋酸
这一步的K置换了SDS(十二烷基磺酸钠)中的Na,得到PDS(十二烷基磺酸钾)沉淀;SDS易与蛋白质结合,平均两个氨基酸上结合一个SDS分子,钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了,同时基因组DNA也被PDS共沉淀
3楼2010-03-27 10:40:16
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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

谢谢各位啦!
花落人亡两不知
4楼2010-03-27 11:06:31
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