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geling1123铜虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】Tail-PCR总是拖带，请帮忙解决！
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大家好，我一直在用Tail-PCR的方法找Tn5的插入基因及位点。 最近做的总是拖带，跑完电泳后条带呈涂抹状。分析了如下原因： 1、基因组浓度太高，模板量稀释不够。但是后来我将模板基因组稀释到20ng,加一微升到25微升的PCR反应体系。 2、酶活性不高吗？由于Tail-PCR每一轮的循环数较多，酶活力是不是不够了？ 3、每一轮的72度延伸时，我用了2min，是不是太长？ 其它方面是不是没有考虑到，如果大家不反对，我将把程序发上来，请大家指导。 |
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