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chengkun

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】高通量筛选

各位高手，最近我要用96孔板作高通量筛选。具体的情况是：我用枯草芽孢杆菌构建蛋白酶的突变文库，筛选时用96孔板，底物选一种合成的复合底物AAPF。具体做时，遇到了一些问题，如底物的使用浓度，反应时间等。其中我最迷惑不解的是如何确定底物AAPF的使用浓度，那位高手能够指点一下，谢谢了。急！

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1楼 2010-03-24 14:25:36

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delia1013

木虫 (著名写手)

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专业: 膜生物化学与膜生物物理学

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

Kd是解离常数，数值上等于平衡常数的倒数
对于最简单的单位点结合，P+L-----PL
Kd=[P]*[L]/[PL],运用质量守恒可得θ=[L]/(Kd+[L]),L是配体浓度，θ是饱和分数。如果有n个结合位点，就要拟合两个参数n 和Kd。具体看看书吧，公式自己推一下。得到的实验数据可用oringe or sigmaplot拟合
还有可以考虑做ITC，可以单次实验得到n和Kd