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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western急急急
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 nanhailiu 的 4 个金币

nanhailiu

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】western急急急

我做的western，结果内参带是出来了，但是带的宽窄不同，且比较弱时由于什么原因啊。我最大的上样量是20ul。这是不是电泳的问题啊。电泳时带一跑到分离胶就开始弥散。不知道怎么回事啊。ph我都校对过了。谢谢大家帮忙啊
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1楼 2010-03-23 21:45:25
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song123

银虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1): 2010-03-24 08:15
nanhailiu(金币+1): 2010-03-30 08:42
这可能是因为到电泳的电压没设置好，在进入分离胶之前最好用小电压，如果还是弥散就再降低电压，将其在进入分离胶之前压成一条直线。
另外就是上样要仔细小心，别让样品溢出或让marker溢出。
还解决不了，我们再讨论。
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书籍备而不读如废纸！
2楼2010-03-23 23:22:01
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
amisking(金币+1): 2010-03-24 08:15
本帖仅楼主可见
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3楼2010-03-24 04:49:46
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fansanjin

新虫 (初入文坛)
tris-hcl的PH值不对，重新调一下PH值
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4楼2010-03-24 10:45:11
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nanhailiu

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2010-03-24 04:49:46:
一跑到分离胶开始弥散？
不会吧，进入胶了就不会弥散了啊，一般浓缩胶可用80V，进入分离胶后用100V，是SDS-PAGE吗？没道理弥散啊，就算弥散也应该是在开始弥散，怎么会到分离胶的时候弥散呢？

我调过了，用ph计调的。
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5楼2010-03-30 08:45:06
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
把图贴上来才能判断
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6楼2010-03-30 08:57:19
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hong_yuli

木虫 (小有名气)
首先先做蛋白浓度测定，这样才能保证上样量的一致。上层胶一般80-90V，分离胶100-120V都可以。
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7楼2010-03-30 09:44:20
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shwjs88

银虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1): 2010-04-01 22:42
nanhailiu(金币+1): 2010-04-20 14:00
带的宽窄不同应该是上样量的问题吧，应该先定量，保证一样的上样量体积不会很一致的。至于扩散的问题，没遇到过。估计是灌胶的问题
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8楼2010-04-01 14:29:09
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tiani_tan

金虫 (小有名气)
nanhailiu(金币+1): 2010-04-20 14:00
带的宽窄应该是胶浓缩的问题，可能是没有浓缩好，导致各处的浓度不一样
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9楼2010-04-01 14:45:35
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zhaoliang

金虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1): 2010-04-01 22:42
nanhailiu(金币+1): 2010-04-20 14:00
我新来的，但我们stacking gel的电压只有50V siperating gel差不多。中间每回都是新的transfer。
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bolabola
10楼2010-04-01 21:00:47
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