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陈思容

铜虫 (正式写手)

引物不长,我的引物30bp都P出来了呢!最近用pfu酶P,也是在最前端有引物二聚体,没有主带,先提高退火温度3°试试看,我一般都是做65-55°的降落PCR
11楼2010-03-24 14:33:11
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Niclo2008

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只有引物二聚体,说明引物没有结合上去,可能退火温度太高了,或是引物特异性不好,可从这两方面改进一下。
12楼2010-03-24 20:23:02
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xiaogang0909

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR本来就的摩条件 哪有那么轻易 卡可卡卡可  就扩初来了
13楼2010-03-25 09:49:19
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nick.nye-0313

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
怀疑你东西搞错了,要不就是没有加!
只为成功找方法
14楼2010-03-25 15:35:27
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libostar

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物设计,退火温度
DNA模板稀释和纯化过吗?
15楼2010-03-25 23:46:52
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
touch down PCR 扩增一次吧,呵呵
16楼2010-03-26 00:09:54
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csjiang1123

木虫 (小有名气)

你确定是引物二聚体吗?你扩增的片段多大?
17楼2010-03-28 22:49:55
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shwjs88

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议升高退火温度,一般升高退火温度可以解决引物二聚体的问题,再就是检查你的引物的特异性是否合适。祝顺利!
18楼2010-04-01 14:35:06
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siben

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物长短没问题的,我的引物27的都有,可能是特异性不强吧,P不出条带来,你可以到NCBI上Blast下,看下特异性怎么样?
最近很困惑!
19楼2010-04-01 21:13:06
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