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yucheng9255

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR出来只有引物二聚体,我该怎么办呢?

我的模板序列
ATGGGAAAAGTTGCGGTGGGAGCAGCAGTGATAGGGGCGGCCGCGGTGGTGGCCGTCACG
GCTTACATCGTCCGCCGCCGCATGCGGTGCGCGAACGGCAGGGTAAAGGCAATGGAGATT
GTGAAGGACTTCGAGGAGGATTGTGCAACCTCGTATTCTAAGCTGAAGCATGTGGCCGAT
GCTATGACTGTGGAGATGCACGCGGGCCTTGCTTCCGAAGGTGGAAGCAAGCTCAAGATG
CTGATCAGCTATGTGGATAATCTACCAACTGGAGATGAGAAAGGATTGTTTTATGCATTG
GACCTTGGTGGAACAAACTTTCGTGTGTTGCGGGTACAATTGGGAGGAAGGGATGGGCGC
ATTGTTAATCAGGAATTTGTTGAGGTGTCGATTCCTCCAAATTTGATGGTTAAGAGTACA
GATGCACTGTTTGACTATATTGCAACTGAACTTGCAAAATTTGTTGCTAAAGAAGGCCCA
GGTTTTCATCTTCCACCTGGTAGGCAGAGGGAACTAGGTTTTACCTTCTCCTTCCCTGTG
ATGCAAACATCAATCAACTCTGGGAATCTTATTAAGTGGACCAAAGGGTTCTCCATAGAT
GATACGATTGGCCGAGACGTGGTGGCAGAATTAACAAAGGCCATAGAAAGAAAAGGCGTT
GATATGCGTGTGTCAGCTCTTGTCAATGATACAATTGGAACACTAGCTGGAGGTAGATAC
TTCAACGATGATGTTGTTGTTGCCGTGATTTTGGGCACTGGATCTAATGCAGCATATGTG
GAACGTGCACAAGCCATACCAAAATGGCAGGGTCTTCTACCTAAATCAGGAGATATGGTT
ATCAACATGGAGTGGGGCAACTTTAGGTCATCACATCTACCATTAACAGAGTATGACCGT
GCAATGGATATTGATAGTTTAAACCCTGGTGAACAGATTTTTGAGAAGCTAGTTTCTGGC
ATGTATTTGGGCGAAATTTTGCGTAGAGTCCTACTCAGGATGGCTGAAGAAGCTGCCTTT
TTTGGTGCCACTGTTCCACCAAAACTTAAAATTCCATTCATATTGAGGACACCTGACATG
TCATCCATGCATCATGACACATCAGTCAATCTCAAAGTGGTTGGGATCAAAATGAAGGAG
ATTTTAGGGATATCTGACACCCCCCTGAAGATGAGAAAAATTGTTGTTCAACTCTGCAAC
ATTGTAGCCACACGTGGGGCTCGCCTTGCGGCTGCTGCTATCTTCGGAGTTCTGAAGAAA
ATGGGCAGAGATACAGTCAGGCCTGGAGAGAAACAGAAGACTGTCATCGCCATGGATGGT
GGATTGTTTGAGCACTACAGTGAGTACAGTAAGTGCTTGGAAAACACACTGAGAGAATTG
GTTGGGGAGCAAGTTTCAGAGAGCCTCTTCATTGAGCATGCCAATGATGGCTCAGGCATT
GGAGCTGCCCTTCTTGCTGCCTCTCATTCCCAGTACATTGGGGTAGAAGAGTCCTGA

我的引物:
R:TCATCTATGGAGAACCCTTTGG
F:GATTGTGAAGGACTTCGAGGAG


[ Last edited by yucheng9255 on 2010-3-23 at 15:47 ]
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lansha8331

无虫 (小有名气)

模板太多了
2楼2010-03-23 17:19:52
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lansha8331

无虫 (小有名气)

写错了,是引物太多了
3楼2010-03-23 17:20:03
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自强1

禁言 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽

4楼2010-03-23 17:21:42
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hong303030

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是的引物太长,15个碱基左右就可以
5楼2010-03-23 19:11:38
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yinsongna

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先确定加样没加错,没少加,没错加,没加模板的话,怎么都扩不出来的
2 用的什么酶?pfu对引物特异性要求高,如果用的是pfu的话扩不出来可以用extaq试试
3 退火温度,是否跑梯度了?如果退火温度差的多,也许是扩出来的有但是因为量太少看不到
希望对你有用
6楼2010-03-23 21:19:00
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695

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这与引物长短关系不大吧,只要引物特异,多长都没问题,还是在体系优化和引物的退火温度上考虑下吧
7楼2010-03-23 21:55:14
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物不算长,22个碱基应该算一般的,我觉得跟条件和引物的特异性都有关系,首先优化条件,不行,就要重新设计引物了
8楼2010-03-23 22:11:55
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引物的量过多
9楼2010-03-24 11:21:52
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Entrez1110


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是引物出问题了吧,分析一下引物之间的碱基配对情况,两条引物Tm值差异,要不采用降落PCR做做看看。
10楼2010-03-24 11:33:45
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