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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR出来只有引物二聚体，我该怎么办呢？
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yucheng9255

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR出来只有引物二聚体，我该怎么办呢？

我的模板序列
ATGGGAAAAGTTGCGGTGGGAGCAGCAGTGATAGGGGCGGCCGCGGTGGTGGCCGTCACG
GCTTACATCGTCCGCCGCCGCATGCGGTGCGCGAACGGCAGGGTAAAGGCAATGGAGATT
GTGAAGGACTTCGAGGAGGATTGTGCAACCTCGTATTCTAAGCTGAAGCATGTGGCCGAT
GCTATGACTGTGGAGATGCACGCGGGCCTTGCTTCCGAAGGTGGAAGCAAGCTCAAGATG
CTGATCAGCTATGTGGATAATCTACCAACTGGAGATGAGAAAGGATTGTTTTATGCATTG
GACCTTGGTGGAACAAACTTTCGTGTGTTGCGGGTACAATTGGGAGGAAGGGATGGGCGC
ATTGTTAATCAGGAATTTGTTGAGGTGTCGATTCCTCCAAATTTGATGGTTAAGAGTACA
GATGCACTGTTTGACTATATTGCAACTGAACTTGCAAAATTTGTTGCTAAAGAAGGCCCA
GGTTTTCATCTTCCACCTGGTAGGCAGAGGGAACTAGGTTTTACCTTCTCCTTCCCTGTG
ATGCAAACATCAATCAACTCTGGGAATCTTATTAAGTGGACCAAAGGGTTCTCCATAGAT
GATACGATTGGCCGAGACGTGGTGGCAGAATTAACAAAGGCCATAGAAAGAAAAGGCGTT
GATATGCGTGTGTCAGCTCTTGTCAATGATACAATTGGAACACTAGCTGGAGGTAGATAC
TTCAACGATGATGTTGTTGTTGCCGTGATTTTGGGCACTGGATCTAATGCAGCATATGTG
GAACGTGCACAAGCCATACCAAAATGGCAGGGTCTTCTACCTAAATCAGGAGATATGGTT
ATCAACATGGAGTGGGGCAACTTTAGGTCATCACATCTACCATTAACAGAGTATGACCGT
GCAATGGATATTGATAGTTTAAACCCTGGTGAACAGATTTTTGAGAAGCTAGTTTCTGGC
ATGTATTTGGGCGAAATTTTGCGTAGAGTCCTACTCAGGATGGCTGAAGAAGCTGCCTTT
TTTGGTGCCACTGTTCCACCAAAACTTAAAATTCCATTCATATTGAGGACACCTGACATG
TCATCCATGCATCATGACACATCAGTCAATCTCAAAGTGGTTGGGATCAAAATGAAGGAG
ATTTTAGGGATATCTGACACCCCCCTGAAGATGAGAAAAATTGTTGTTCAACTCTGCAAC
ATTGTAGCCACACGTGGGGCTCGCCTTGCGGCTGCTGCTATCTTCGGAGTTCTGAAGAAA
ATGGGCAGAGATACAGTCAGGCCTGGAGAGAAACAGAAGACTGTCATCGCCATGGATGGT
GGATTGTTTGAGCACTACAGTGAGTACAGTAAGTGCTTGGAAAACACACTGAGAGAATTG
GTTGGGGAGCAAGTTTCAGAGAGCCTCTTCATTGAGCATGCCAATGATGGCTCAGGCATT
GGAGCTGCCCTTCTTGCTGCCTCTCATTCCCAGTACATTGGGGTAGAAGAGTCCTGA

我的引物：
R:TCATCTATGGAGAACCCTTTGG
F:GATTGTGAAGGACTTCGAGGAG

[ Last edited by yucheng9255 on 2010-3-23 at 15:47 ]
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1楼 2010-03-23 15:45:55
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lansha8331

无虫 (小有名气)
模板太多了
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2楼2010-03-23 17:19:52
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lansha8331

无虫 (小有名气)
写错了，是引物太多了
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3楼2010-03-23 17:20:03
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自强1

禁言 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
4楼2010-03-23 17:21:42
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hong303030

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是的引物太长，15个碱基左右就可以
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5楼2010-03-23 19:11:38
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先确定加样没加错，没少加，没错加，没加模板的话，怎么都扩不出来的
2 用的什么酶？pfu对引物特异性要求高，如果用的是pfu的话扩不出来可以用extaq试试
3 退火温度，是否跑梯度了？如果退火温度差的多，也许是扩出来的有但是因为量太少看不到
希望对你有用
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6楼2010-03-23 21:19:00
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695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这与引物长短关系不大吧，只要引物特异，多长都没问题，还是在体系优化和引物的退火温度上考虑下吧
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7楼2010-03-23 21:55:14
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物不算长，22个碱基应该算一般的，我觉得跟条件和引物的特异性都有关系，首先优化条件，不行，就要重新设计引物了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-03-23 22:11:55
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引物的量过多
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9楼2010-03-24 11:21:52
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Entrez1110

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是引物出问题了吧，分析一下引物之间的碱基配对情况，两条引物Tm值差异，要不采用降落PCR做做看看。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-03-24 11:33:45
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