24小时热门版块排行榜    

查看: 2102  |  回复: 10
当前主题已经存档。

maria229

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】DNaseI处理后,加EDTA失活,RNA居然降解了

体外转录的样品,用的1ugDNA模板,转录后加了2U DNaseI处理,然后加10mMEDTA 65C10min ,结果RNA降解了,不知到什么原因。急求解答,万分感谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★
1949stone(金币+1): 2010-03-22 11:07
估计是DNaseI被RNase污染了。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-03-22 10:25:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maria229

木虫 (著名写手)

不是的,我DNaseI处理之后跑过电泳,没有降解,之后也是加和不加EDTA的样品同样跑的,没降解呀。
3楼2010-03-22 11:04:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

iaminxanadu

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-03-22 13:30
首先明确,RNase 不存在时金属离子时具有活性的。后加EDTA 如果污染了RNase。。。。

[ Last edited by iaminxanadu on 2010-3-22 at 11:16 ]
4楼2010-03-22 11:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maria229

木虫 (著名写手)

可是我单独做了有RNA有buffer还有EDTA时的对照,这里的RNA并没有降解呀,应该说明EDTA并没有污染RNase。而且我之前先后做了两个样品都是降解的。
5楼2010-03-22 12:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1): 2010-03-22 18:58
楼主的实验设计的很严谨,真的看不出有什么漏洞,会不会是65摄氏度RNA受不了了,毕竟是体外转录的RNA嘛
6楼2010-03-22 13:24:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我有时也遇到这个问题,我一般不加EDTA终止,而是直接做反转录或再抽提后再反转录。
7楼2010-03-22 14:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

骚人追月

金虫 (小有名气)

★
司马诸葛(金币+1): 2010-03-22 18:58
+点甲醛试试
会做饭就会做实验?
8楼2010-03-22 16:23:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
EDTA是RNase FREE的吗,可能是EDTA的问题
9楼2010-03-22 16:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maria229

木虫 (著名写手)

谢谢大家的回答,再问下7楼的won7  :不加EDTA失活DNaseI而直接做RT的话,DNaseI不会降解新合成的cDNA是吗?好像我记得DNaseI作用的是dsDNA,那么像RNA-cDNA杂合的双链,以及单链状态的cDNA是不能被降解的,对吗?如果是这样,我也就直接做RT好了。抽提的话,我担心损失的太多了。
10楼2010-03-22 18:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 maria229 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1Nb0IVlmV6v0 2026-11-11 4/200 2026-11-13 11:18 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 6/300 2026-11-12 12:42 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:26 by ECLTXnJnRSXf
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-11 5/250 2026-11-12 11:44 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-11 5/250 2026-11-12 11:44 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:31 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:36 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:42 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 7/350 2026-11-12 05:41 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
信息提示
请填处理意见