应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助嵌套式PCR第二步没条带
51/1返回列表
查看: 745  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

feimei1023

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助嵌套式PCR第二步没条带

我做嵌套式PCR，第二步产物跑电泳没有条带，都集中在点样孔处。不知道怎么办，是哪里出错了么？希望高手指点，说下nested-pcr的具体操作要点和步骤。第二步产物要稀释么？怎么稀释？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-22 09:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
第一套的引物扩出来的产物里有没有你的目的条带呢？如果引物不特异，不一定有的啊
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-23 09:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一步产物做一系列的稀释作为第二步的模板PCR。可能在某个稀释度就P出来了。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-03-22 10:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
同意楼上，要稀释10倍到50倍
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-22 13:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能是模板浓度太高了，一般情况First PCR产物如果没有条带的话可以直接作为Nest PCR的模板，如果有Smear 或者条带，都需要稀释的，具体的稀释倍数你可以做个浓度梯度摸索一下，因为对于不同的实验不一样的！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-03-22 13:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭