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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助嵌套式PCR第二步没条带
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feimei1023

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助嵌套式PCR第二步没条带

我做嵌套式PCR，第二步产物跑电泳没有条带，都集中在点样孔处。不知道怎么办，是哪里出错了么？希望高手指点，说下nested-pcr的具体操作要点和步骤。第二步产物要稀释么？怎么稀释？
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1楼 2010-03-22 09:51:51
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一步产物做一系列的稀释作为第二步的模板PCR。可能在某个稀释度就P出来了。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-03-22 10:24:04
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
同意楼上，要稀释10倍到50倍
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3楼2010-03-22 13:46:34
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有可能是模板浓度太高了，一般情况First PCR产物如果没有条带的话可以直接作为Nest PCR的模板，如果有Smear 或者条带，都需要稀释的，具体的稀释倍数你可以做个浓度梯度摸索一下，因为对于不同的实验不一样的！
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4楼2010-03-22 13:47:24
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feimei1023

铁虫 (初入文坛)
谢谢各位，我去试试看
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5楼2010-03-22 23:19:33
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
第一套的引物扩出来的产物里有没有你的目的条带呢？如果引物不特异，不一定有的啊
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6楼2010-03-23 09:11:02
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feimei1023

铁虫 (初入文坛)
我又试了下，稀释20倍，30倍，40倍，50倍，都没有条带吖
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7楼2010-03-25 08:49:12
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amilie030312

金虫 (正式写手)
贴张的图上来看看
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8楼2010-03-25 09:04:47
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feimei1023

铁虫 (初入文坛)
没有条带……在稀释之前是集中在点样孔处，稀释后就什么都没有了，超级干净……
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9楼2010-03-25 11:31:34
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