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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接体系怎么确定
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lly198784

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】连接体系怎么确定

我的目的基因片段双酶切纯化后浓度时18.2ng/ul，片段长度4174bp;
载体双酶切后胶回收浓度时7.8ng/ul，片段长度是1300bp;
如果我做20ul的连接体系，怎么确定目的基因片段和载体的比例呢？应该各加多少呢？
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1楼 2010-03-19 16:08:11
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
lly198784(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 2010-03-19 21:11
3-10：1，一般来说超过1000的，目的片段就尽量多点，连接时间长点
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-03-19 17:50:53
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
lly198784(金币+1):谢谢参与
????е???
?????????10???????????
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-03-19 17:24:33
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
lly198784(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 2010-03-19 21:12
1ug of 1000bp DNA=1.52pmol(3.03 pmol of ends)
双链DNA的mol数=DNA质量g/(660×碱基数)
基因：载体=3-10：1
赞一下(2人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
6楼2010-03-19 19:42:37
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zhyzx

金虫 (小有名气)
★ ★
lly198784(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 2010-03-19 21:12
数据好详细啊！佩服佩服，我们实验室一般不测含量，连接的时候载体（不含T载体）1ul，片段8ul，酶一共1ul
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-03-19 20:09:39
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