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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接体系怎么确定
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lly198784

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】连接体系怎么确定

我的目的基因片段双酶切纯化后浓度时18.2ng/ul，片段长度4174bp;
载体双酶切后胶回收浓度时7.8ng/ul，片段长度是1300bp;
如果我做20ul的连接体系，怎么确定目的基因片段和载体的比例呢？应该各加多少呢？
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1楼 2010-03-19 16:08:11
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
★
lly198784(金币+1):谢谢参与
顶
2楼2010-03-19 16:49:00
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
顶
3楼2010-03-19 16:49:08
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yang0071

木虫 (职业作家)
★
lly198784(金币+1):谢谢参与
????е???
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4楼2010-03-19 17:24:33
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
lly198784(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 2010-03-19 21:11
3-10：1，一般来说超过1000的，目的片段就尽量多点，连接时间长点
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-03-19 17:50:53
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j2

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
lly198784(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 2010-03-19 21:12
1ug of 1000bp DNA=1.52pmol(3.03 pmol of ends)
双链DNA的mol数=DNA质量g/(660×碱基数)
基因：载体=3-10：1
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
6楼2010-03-19 19:42:37
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zhyzx

金虫 (小有名气)
★ ★
lly198784(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 2010-03-19 21:12
数据好详细啊！佩服佩服，我们实验室一般不测含量，连接的时候载体（不含T载体）1ul，片段8ul，酶一共1ul
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7楼2010-03-19 20:09:39
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cato8163

银虫 (正式写手)
★ ★
lly198784(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 2010-03-19 21:12
一个试剂盒中这样写到：
插入片段体积(μl) = T载体量(ng)x 插入片段大小(kb)÷T载体大小(kb)x插入片段与T载体的摩尔比(3~10:1) ÷ 插入片段浓度(ng/μl)。
例：浓度为20 ng/μl的500 bp PCR 插入片段应加体积为40 ng x 0.5 kb ÷ 3 kb x 3 ÷ 20 ng/μl = 1 μl
当然，你也可以参照你所用的试剂盒说明。
算法都是这样的。
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8楼2010-03-19 21:09:59
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
顶啊
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严于律己，宽以待人
9楼2010-03-20 10:19:47
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vonsun

金虫 (正式写手)
★
lly198784(金币+1):谢谢参与
一般不详细计算，通过电泳看亮度粗略判读浓度，基因片段与载体比列 3：1.
效果不错
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10楼2010-03-20 14:45:26
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