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汕头大学海洋科学接受调剂
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ivyxiao

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】kpnI 和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+)

我用KpnI 和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+),在这个载体上两个酶切位点紧挨着,我先用KpnI 切,然后用HindIII酶切,结果发现载体自连特别多,大家有什么高招能成功双酶切?
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ivyxiao

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-03-18 19:59:26:
内切酶,顾名思义要在内部才能切的酶
你KpnI 切了以后,HindIII序列就暴露在最外面,怎么内切

现在实验已经做到这一步了。还有没有解决的办法?
3楼2010-03-20 11:04:31
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yang0071

木虫 (职业作家)

★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-18 21:33
内切酶,顾名思义要在内部才能切的酶
你KpnI 切了以后,HindIII序列就暴露在最外面,怎么内切
2楼2010-03-18 19:59:26
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-03-21 16:10
你可以两个酶一块切啊,Fermentas公司的Fastdigest enzymes,
4楼2010-03-20 12:09:05
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dongyi3041

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+5):鼓励新虫! 2010-03-21 16:10
直接双酶切啦,先确定两种酶的缓冲液,以及公司推荐的酶比例,应该没问题的
我是兽医
5楼2010-03-21 12:28:58
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