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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】kpnI 和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+)
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ivyxiao

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】kpnI 和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+)

我用KpnI 和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+)，在这个载体上两个酶切位点紧挨着，我先用KpnI 切，然后用HindIII酶切，结果发现载体自连特别多，大家有什么高招能成功双酶切？
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1楼 2010-03-18 17:02:46
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yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-03-18 21:33
内切酶，顾名思义要在内部才能切的酶
你KpnI 切了以后，HindIII序列就暴露在最外面，怎么内切
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2楼2010-03-18 19:59:26
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ivyxiao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2010-03-18 19:59:26:
内切酶，顾名思义要在内部才能切的酶
你KpnI 切了以后，HindIII序列就暴露在最外面，怎么内切

现在实验已经做到这一步了。还有没有解决的办法？
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3楼2010-03-20 11:04:31
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 2010-03-21 16:10
你可以两个酶一块切啊，Fermentas公司的Fastdigest enzymes，
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4楼2010-03-20 12:09:05
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dongyi3041

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5):鼓励新虫！ 2010-03-21 16:10
直接双酶切啦，先确定两种酶的缓冲液，以及公司推荐的酶比例，应该没问题的
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我是兽医
5楼2010-03-21 12:28:58
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ivyxiao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dongyi3041 at 2010-03-21 12:28:58:
直接双酶切啦，先确定两种酶的缓冲液，以及公司推荐的酶比例，应该没问题的

恩，试试双酶切，看看切得效果如何
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6楼2010-03-21 14:33:27
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buckuper

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ivyxiao at 2010-03-21 14:33:27:


恩，试试双酶切，看看切得效果如何

为什么要先后的，双酶切挺方便的啊
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7楼2010-03-21 16:10:22
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ivyxiao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by buckuper at 2010-03-21 16:10:22:

为什么要先后的，双酶切挺方便的啊

这两种酶没有通用的buffer，所以选择的是分开酶切
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8楼2010-03-23 09:21:21
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