应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接 酶切的问题
51/1返回列表
查看: 461  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wbfree

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】连接 酶切的问题

我的目的片段4000bp，PCR回收效果很好，用pMD19-T载体连接、转化之后做酶切，但是酶切之后只有略小于载体片段的带型，请哪位高手指点一下 ，是不是没有连上，还是没有切开？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-03-18 10:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
胶回收的时候，看起来片段要大一点，质粒酶切后看起来又小了点，正常的，只要确实是有载体片段有目的片段，应该是连进去了
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-18 10:42:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gaozx123

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
转化有没有做蓝白斑筛选啊，应该做一个，然后可以再做一个菌落PCR验证一下。确定之后再酶切检测一下。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-03-18 10:08:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得你应该连进去了，pMD19-T载体有3351bp（是这么大吗？），然而你连进去的片段有4000bp，那么连进去这后你跑质粒就应该对照看出来大了很多。
    如果你酶切验证时，4000bp和3350bp如果不跑的时间长点应该不好分开就像一条带吧，所以你可能误以为没有连进去或者变小了，所以你应该把胶浓度配的小点7-8%，然后跑的时间长点，应该能看清楚的
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-03-18 10:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wbfree

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gaozx123 at 2010-03-18 10:08:47:
转化有没有做蓝白斑筛选啊，应该做一个，然后可以再做一个菌落PCR验证一下。确定之后再酶切检测一下。

我做蓝白斑筛选了，没有做菌液PCR，直接提的质粒DNA酶切的，酶切之后只有一条略小于载体的带，我觉得是没有连接上。
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-19 08:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 271求调剂 +20 2261744733 2026-04-11 22/1100 2026-04-11 23:14 by labixiaoqiao
[考研] 求调剂，985材料与化工348分 +7 涵竹刘 2026-04-11 9/450 2026-04-11 23:13 by 溪涧流水
[考研] 277 数一104，学硕，求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
[考研] 0859，337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 吉大计算机技术331分，英语六级，求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 296求调剂 +6 汪！？！ 2026-04-08 6/300 2026-04-10 11:02 by mattzhming
[考研] 生物与医药调剂 +5 十七sa 2026-04-05 5/250 2026-04-10 08:14 by kangsm
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-06 14/700 2026-04-08 23:00 by 猪会飞
[考研] 一志愿郑州大学085600求调剂 +21 吃的不少 2026-04-05 24/1200 2026-04-08 16:47 by sunhuadong
[考研] 307分材料专业求调剂 +12 Hll胡 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:33 by luoyongfeng
[考研] 338求调剂 +8 wxygxsaaaaa 2026-04-06 8/400 2026-04-08 06:58 by 无际的草原
[考研] 305求调剂 +4 77Qi 2026-04-06 4/200 2026-04-07 20:06 by shanqishi
[考研] 生物学363调剂求助 +7 fanzhang6666 2026-04-06 9/450 2026-04-07 17:37 by lijunpoly
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭