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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】酵母质粒表达

1、请问酵母表达里,pPICZA质粒转入进酵母内后,质粒和酵母染色体是整合的呢,还是单独存在的呢?能否用酵母试剂盒提取呢?
2、如果想多一点表达质粒,是不是用甲醇诱导?我知道甲醇可以诱导表达蛋白量,但是能诱导表达质粒的量么?

谢谢高手
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

pidou213(金币+1):谢谢回复啊 2010-03-18 21:21
1,整合
2,0.5%,每24小时补加一次。
pPICZA操作手册,可下载,看完不求人。
http://www.helixnet.cn/bbs/thread-18234-1-1.html
Thank-you,so-blue.
2楼2010-03-18 09:07:46
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lcat

木虫 (小有名气)

pidou213(金币+1):谢谢 2010-03-18 21:21
嗯 楼上说的对 好好看看毕赤酵母表达手册就全明白啦 可能以后还会遇到各种各样的问题呢
这个质粒是整合的,也就不存在提取、质粒拷贝数等问题啦。甲醇作用是诱导醇氧化酶启动子,启动目的基因的表达。可以先用0.5%试一下,有表达的话再优化一下浓度,也不是越高越好。
3楼2010-03-18 16:59:05
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pidou213

木虫 (正式写手)

请问那怎么还存在酵母质粒提取的试剂盒呢??
引用回帖:
Originally posted by lcat at 2010-03-18 16:59:05:
嗯 楼上说的对 好好看看毕赤酵母表达手册就全明白啦 可能以后还会遇到各种各样的问题呢
这个质粒是整合的,也就不存在提取、质粒拷贝数等问题啦。甲醇作用是诱导醇氧化酶启动子,启动目的基因的表达。可以先用0. ...

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4楼2010-03-18 21:21:57
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

pidou213(金币+1):谢谢解答啊 2010-03-20 23:19
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-03-18 21:21:57:
请问那怎么还存在酵母质粒提取的试剂盒呢??




因为酵母质粒分两种嘛,一种是整合型,重组质粒线性化后整合进酵母基因组;另外一种是附加型的,独立于基因组,有一定的拷贝数(于原核载体一样),当然就存在酵母质粒提取的试剂盒了。
Thank-you,so-blue.
5楼2010-03-19 08:46:01
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pidou213

木虫 (正式写手)

看来我买的试剂盒要浪费了!~
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-03-19 08:46:01:

因为酵母质粒分两种嘛,一种是整合型,重组质粒线性化后整合进酵母基因组;另外一种是附加型的,独立于基因组,有一定的拷贝数(于原核载体一样),当然就存在酵母质粒提取的试剂盒了。

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6楼2010-03-20 23:19:18
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