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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】xba1 酶切
汕头大学海洋科学接受调剂
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tanfeng198

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】xba1 酶切

xba1酶切体系怎么样，酶切效率能高一点？
xba1 在大肠杆菌内容易被甲基化，切不动。
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1楼 2010-03-17 17:26:36
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cascc

铜虫 (小有名气)
我们一般使用的酶通常不用考虑甲基化的问题。只要质粒正确，按照试剂规定的buffer是可以切开的，况且我们一般使用的酶量都是过量的。建议切50ul体系。buffer 5ul，酶1ul
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2楼2010-03-17 20:14:21
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以选择不易甲基化的菌株进行质粒的复制，
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3楼2010-03-17 20:16:05
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虫虫博士

新虫 (小有名气)
不用考虑甲基化的
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4楼2010-03-17 20:26:13
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用Xba1时一定要注意甲基化的问题，一些大肠的Dam甲基化酶可以识别GATC序列中的腺嘌呤，N6，并使其甲基化。这样一些限制酶，如Bcl1,Xba1等就切不开了。
我以前遇到过这样问题，费了大力气都切不开。
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5楼2010-03-18 08:35:59
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Emily_guo

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
xba1 在大肠杆菌内容易被甲基化是碰到了这样的序列
TCTAGATC或gatctaga，换一下宿主会解决这个问题。
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6楼2010-03-18 08:40:52
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