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tanfeng198

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】xba1 酶切

xba1酶切体系怎么样,酶切效率能高一点?
xba1 在大肠杆菌内容易被甲基化,切不动。
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cascc

铜虫 (小有名气)

我们一般使用的酶通常不用考虑甲基化的问题。只要质粒正确,按照试剂规定的buffer是可以切开的,况且我们一般使用的酶量都是过量的。建议切50ul体系。buffer 5ul,酶1ul
2楼2010-03-17 20:14:21
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以选择不易甲基化的菌株进行质粒的复制,
3楼2010-03-17 20:16:05
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虫虫博士

新虫 (小有名气)

不用考虑甲基化的
4楼2010-03-17 20:26:13
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小周

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用Xba1时一定要注意甲基化的问题,一些大肠的Dam甲基化酶可以识别GATC序列中的腺嘌呤,N6,并使其甲基化。这样一些限制酶,如Bcl1,Xba1等就切不开了。
我以前遇到过这样问题,费了大力气都切不开。
5楼2010-03-18 08:35:59
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Emily_guo

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
xba1 在大肠杆菌内容易被甲基化是碰到了这样的序列
TCTAGATC或gatctaga,换一下宿主会解决这个问题。
6楼2010-03-18 08:40:52
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