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骑着蜗牛追火箭

木虫 (著名写手)

纳米小生

[交流] 【求助/交流】关于细胞培养的几个问题

各位大侠:
       小弟转行养细胞,一些问题不懂,特来请教!
       血清冻存时发现上层变清,下层为黄色,解冻后仍然如此,但摇一下以后又好了,且不再分层.这样的血清还能用吗?-20度只放了两个月.
       我用的胰酶是带酚红的那种,红色,为了使用方便,分装成小瓶了,只是因为准备工作的原因,把它分两批操作的,第一天装的冻存后还是红色,第二天装的却变成无色了,这是什么原因?还有活性么?
       培养基加血清是不是要现配现用?最多能放多久?
       培养基粉剂的开包了如果不配完的话,干粉能放多久?

        在下外行,可能问题没有含金量,请各位不吝赐教!
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

骑着蜗牛追火箭(金币+5):谢谢.短期保存是多久? 2010-03-16 18:49
血清没问题
胰酶无色的不要用了,PH变了,难免是污染
培养基最好现用现加血清,加好后四度短期保存
干粉不配的话,封好后放四度,时间尽量不要太长,
2楼2010-03-16 17:27:00
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liyangmiscap

木虫 (著名写手)

骑着蜗牛追火箭(金币+5):谢谢 2010-03-16 20:25
血清买来后最好分装在多个小瓶里,方便使用,反复冻存会对其中的一些活性物质有影响。
胰酶解冻后可以保存在4℃冰箱里,也最好找一小瓶装一些方便消化时在水浴锅中孵育;变无色了估计不能用了
维持培养基一般需要的血清量比较少,可以在容量瓶里定容,更便于方便配制,在4℃保存1~2个月是没太有问题的
愿与你携手,沿河看柳
3楼2010-03-16 20:17:06
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jAnmee

银虫 (正式写手)

骑着蜗牛追火箭(金币+5):谢谢 2010-03-17 08:14
“血清冻存时发现上层变清,下层为黄色,解冻后仍然如此,但摇一下以后又好了,且不再分层”

不要紧,不放心的话可以0.45啥啥的过滤
国荣,家驹,MJ,为什么我喜欢的恩都死了。。。。
4楼2010-03-17 02:40:36
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mxbeaver

木虫 (著名写手)

浪滔滔~人渺渺~

骑着蜗牛追火箭(金币+3):我买的胰酶是直接用的那种,不是自己配制的,买来就是红色,卖家说是酚红,不知道为什么要加酚红. 2010-03-17 08:43
骑着蜗牛追火箭(金币+2):我本科学应用化学,硕士学材料,要往细胞方向做,得自己养细胞.新手上路,多交流啊 2010-03-17 08:45
“血清冻存时发现上层变清,下层为黄色,解冻后仍然如此,但摇一下以后又好了,且不再分层.”
这是正常的现象,可以放心用。
血清分成小份,现用现加(当然是以培养液的瓶为单位的)
胰酶带酚红?有什么作用呢?没用过带酚红的


楼主,你真的是从应化转行养细胞的么?硕士?

[ Last edited by mxbeaver on 2010-3-17 at 08:38 ]
5楼2010-03-17 08:36:20
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happy_niu

金虫 (小有名气)

骑着蜗牛追火箭(金币+2):那胰酶呢? 2010-03-17 09:27
嗯,血清这样保存应该没问题的。
拓宽思路
6楼2010-03-17 09:09:34
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jAnmee

银虫 (正式写手)

骑着蜗牛追火箭(金币+5):谢谢.胰酶溶液瓶子上写的-20度两年.只是分装一下,隔了一天,差别就那么大. 2010-03-18 08:13
姨酶 可以粉末的话放入-20 半年也没啥大问题。
溶液的话-4,尽快用吧… 我们一般150ml的姨酶一个月也就差不多over了。。。

酚红是pH指示剂。
新鲜的培养基红色的,培养段时间就变成粉红了(24h),再培养的话(48h)就变成黄色的了。。pH变化说明细胞生长旺盛。。如果你细胞培养没咋长,颜色一般不会很大变化(当然,和你培养箱二氧化碳浓度也有关)。不过我这之前说的颜色变化不同细胞之间也应该有差别吧,我用的是F11细胞系。
国荣,家驹,MJ,为什么我喜欢的恩都死了。。。。
7楼2010-03-18 02:53:31
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