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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌落PCR VS 提质粒测序
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR VS 提质粒测序

1、请问是菌落PCR和 提质粒测序哪一种更方便快捷一点？
2、我总感觉PCR需要摸索大量的条件，不是很容易P出来，不知道大家的看法怎么样？


请大家一起来....
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见得多爱的多
1楼 2010-03-16 12:14:39
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
我都是挑好菌后摇起来再加1微升菌液PCR，好P的序列，基本上都能P出来，有阳性的直接送测序。省时间
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6楼2010-03-17 11:11:29
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-03-16 21:04
菌落PCR不同于一般的PCR，引物序列位于载体上，很容易就做出来了，退火温度也不需要筛选，但是菌落PCR由于很多原因，其可靠性不如回收质粒酶切可靠。
由于菌落PCR方便快捷不容忽视，我们一般选择两种方法结合来做，多挑选几个菌斑PCR，同时将这些菌斑进行放大，PCR结果出来后，选取少数几个阳性提质粒，酶切鉴定，通常会发现，菌落PCR阳性的结果，很多片段大小还存在问题，最后将酶切正确的阳性，送样测序
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2楼2010-03-16 12:52:08
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pidou213

木虫 (正式写手)
那也就是把所有的方法都做一遍啦？？
我做的酵母表达，听说转入酵母的都是整合型，如酵母整合在一起了，没有质粒存在了呢？
所以质粒很难提取啊
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-16 12:52:08:
菌落PCR不同于一般的PCR，引物序列位于载体上，很容易就做出来了，退火温度也不需要筛选，但是菌落PCR由于很多原因，其可靠性不如回收质粒酶切可靠。
由于菌落PCR方便快捷不容忽视，我们一般选择两种方法结合来做 ...

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见得多爱的多
3楼2010-03-16 13:04:48
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-03-16 13:04:48:
那也就是把所有的方法都做一遍啦？？
我做的酵母表达，听说转入酵母的都是整合型，如酵母整合在一起了，没有质粒存在了呢？
所以质粒很难提取啊


那你就多送几个阳性吧，测序后分析吧，就是能多花点钱，看你们老板有没有钱了
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4楼2010-03-16 17:00:31
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