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pidou213

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[交流] 【求助/交流】菌落PCR VS 提质粒测序

1、请问是菌落PCR和提质粒测序哪一种更方便快捷一点？
2、我总感觉PCR需要摸索大量的条件，不是很容易P出来，不知道大家的看法怎么样？

请大家一起来....

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见得多爱的多

1楼 2010-03-16 12:14:39

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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-03-16 21:04

菌落PCR不同于一般的PCR，引物序列位于载体上，很容易就做出来了，退火温度也不需要筛选，但是菌落PCR由于很多原因，其可靠性不如回收质粒酶切可靠。
由于菌落PCR方便快捷不容忽视，我们一般选择两种方法结合来做，多挑选几个菌斑PCR，同时将这些菌斑进行放大，PCR结果出来后，选取少数几个阳性提质粒，酶切鉴定，通常会发现，菌落PCR阳性的结果，很多片段大小还存在问题，最后将酶切正确的阳性，送样测序

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2楼2010-03-16 12:52:08

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pidou213

木虫 (正式写手)

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那也就是把所有的方法都做一遍啦？？
我做的酵母表达，听说转入酵母的都是整合型，如酵母整合在一起了，没有质粒存在了呢？
所以质粒很难提取啊

引用回帖:

Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-16 12:52:08:
菌落PCR不同于一般的PCR，引物序列位于载体上，很容易就做出来了，退火温度也不需要筛选，但是菌落PCR由于很多原因，其可靠性不如回收质粒酶切可靠。
由于菌落PCR方便快捷不容忽视，我们一般选择两种方法结合来做 ...

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见得多爱的多

3楼2010-03-16 13:04:48

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