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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR VS 提质粒测序

1、请问是菌落PCR和 提质粒测序哪一种更方便快捷一点?
2、我总感觉PCR需要摸索大量的条件,不是很容易P出来,不知道大家的看法怎么样?


请大家一起来....
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-03-16 21:04
菌落PCR不同于一般的PCR,引物序列位于载体上,很容易就做出来了,退火温度也不需要筛选,但是菌落PCR由于很多原因,其可靠性不如回收质粒酶切可靠。
由于菌落PCR方便快捷不容忽视,我们一般选择两种方法结合来做,多挑选几个菌斑PCR,同时将这些菌斑进行放大,PCR结果出来后,选取少数几个阳性提质粒,酶切鉴定,通常会发现,菌落PCR阳性的结果,很多片段大小还存在问题,最后将酶切正确的阳性,送样测序
2楼2010-03-16 12:52:08
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pidou213

木虫 (正式写手)

那也就是把所有的方法都做一遍啦??
我做的酵母表达,听说转入酵母的都是整合型,如酵母整合在一起了,没有质粒存在了呢?
所以质粒很难提取啊
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-16 12:52:08:
菌落PCR不同于一般的PCR,引物序列位于载体上,很容易就做出来了,退火温度也不需要筛选,但是菌落PCR由于很多原因,其可靠性不如回收质粒酶切可靠。
由于菌落PCR方便快捷不容忽视,我们一般选择两种方法结合来做 ...

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3楼2010-03-16 13:04:48
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-03-16 13:04:48:
那也就是把所有的方法都做一遍啦??
我做的酵母表达,听说转入酵母的都是整合型,如酵母整合在一起了,没有质粒存在了呢?
所以质粒很难提取啊


那你就多送几个阳性吧,测序后分析吧,就是能多花点钱,看你们老板有没有钱了
4楼2010-03-16 17:00:31
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pidou213

木虫 (正式写手)

当然是老板没有钱才这样说的嘛!~嘿嘿


那经济实惠的方法是什么呢?

还请不吝赐教啊!~




如果没有测序的话,其他的方法具有强的说服力么?
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-03-16 17:00:31:


那你就多送几个阳性吧,测序后分析吧,就是能多花点钱,看你们老板有没有钱了

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5楼2010-03-16 20:03:51
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mofatuzi

新虫 (小有名气)

我都是挑好菌后摇起来再加1微升菌液PCR,好P的序列,基本上都能P出来,有阳性的直接送测序。省时间
6楼2010-03-17 11:11:29
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