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铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】连接后的问题

我将一个1500bp的片段连接到载体中，做菌落PCR有目的片段，大小也合适，但是提取质粒酶切验证只有1200bp，再做PCR也P不出来了。用下游引物测序后进行比对也是需要的片段。这到底是怎么回事啊？会不会我只是转进去一部分，可是用的是双酶切啊！请教大家！

1楼 2010-03-16 10:14:53

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至尊木虫 (文坛精英)

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amisking(金币+3): 2010-03-16 12:33

怎么不测通啊！
觉得是有点奇怪，会不会是插入片段发生突变，正好产生了一个同上游片段相同的酶切位点，但是质粒pcr出不来有不好解释。转进去一部分，但是菌落pcr 能扩增出1500bp的片段又不好解释。
测通序列比对一下再说吧

几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋

2楼2010-03-16 10:28:14

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金虫 (小有名气)

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1949stone(金币+1): 2010-03-16 12:12

possibly there is an internal restriction site at 0.3 kb from one end.

that explains why you can't get the PCR fragment after digestion.

3楼2010-03-16 10:43:47

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木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

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楼上有理，测通比对下吧。

Thank-you，so-blue.

4楼2010-03-16 15:04:31

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