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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

怎么都是测序啊 大家没出现过类似问题么
11楼2010-03-19 09:00:21
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huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

我最近进行测序了 发现Hind III 酶切位点发生了突变 但是用Hind III做单酶切时为什么能切开呢
12楼2010-03-30 14:32:14
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j2

木虫 (正式写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
如果2段差别很大,一般的电泳看不出来也正常吧
如果只是点突变的话,酶切位点还是可能识别的~
修炼ing,当虫仙……
13楼2010-03-30 15:12:25
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hui_student

银虫 (小有名气)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
huangdi07(金币+2): 2010-04-05 15:17
哎,辛苦楼主了,想的检测方法不少,你的问题和我以前遇到的一样。或许你找问题的地方不对··
当时我的情况是这样CR出现目的条带,单酶切成功,双酶切不成功。后来仔细琢磨才发现是连接成功率太低的问题,PCR出条带,是因为存在少量的阳性重组子,单酶切"成功”是因为载体碱基数和我的目的带相比要大的多,加上跑胶与MARKER比较确定的碱基数也很难确定,就自认为是正确··,双酶切可想而知是不成功了,应为阳性重组子太少了。
要是楼主实在找不到答案,我建议你还是重新连接吧··,一定要确定连接体系没问题,确保连接效率,后边的问题就相应的少很多了,祝好运!
一路前行!
14楼2010-03-30 15:40:46
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yet

铜虫 (小有名气)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by huangdi07 at 2010-03-30 14:32:14:
我最近进行测序了 发现Hind III 酶切位点发生了突变 但是用Hind III做单酶切时为什么能切开呢

不要问那么多为什么,能做出来就行。
如果HindIII能切开的话,说明你另一个酶没有切开,建议加大酶量再切!
15楼2010-03-30 20:31:48
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yinsongna

金虫 (正式写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
我也遇到同样的问题。。。
16楼2010-03-30 21:54:28
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angel2536

金虫 (著名写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
验证使从质粒上进行PCR吧,理应是连接上了。
不知单酶切是否完全切开,是不是酶活性不行了?
按你说的,第二种方案已经可行了,单还是没切出就不应该了。。。。
17楼2010-03-31 10:12:42
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王庭

木虫 (著名写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
会不会是两种酶所需活性条件差别大啊,这样就导致只有单酶起明显的作用
努力做最好的自己!!
18楼2010-03-31 10:34:31
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十二1130

银虫 (小有名气)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
我也遇到了同样的问题,双酶切之后目的条带根本就看不到
19楼2010-03-31 14:25:29
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acaifeng

银虫 (初入文坛)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
测序来的比较直接
20楼2010-03-31 14:38:35
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