24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1998  |  回复: 31

huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

怎么都是测序啊 大家没出现过类似问题么
11楼2010-03-19 09:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)

我最近进行测序了 发现Hind III 酶切位点发生了突变 但是用Hind III做单酶切时为什么能切开呢
12楼2010-03-30 14:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
如果2段差别很大,一般的电泳看不出来也正常吧
如果只是点突变的话,酶切位点还是可能识别的~
修炼ing,当虫仙……
13楼2010-03-30 15:12:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hui_student

银虫 (小有名气)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
huangdi07(金币+2): 2010-04-05 15:17
哎,辛苦楼主了,想的检测方法不少,你的问题和我以前遇到的一样。或许你找问题的地方不对··
当时我的情况是这样CR出现目的条带,单酶切成功,双酶切不成功。后来仔细琢磨才发现是连接成功率太低的问题,PCR出条带,是因为存在少量的阳性重组子,单酶切"成功”是因为载体碱基数和我的目的带相比要大的多,加上跑胶与MARKER比较确定的碱基数也很难确定,就自认为是正确··,双酶切可想而知是不成功了,应为阳性重组子太少了。
要是楼主实在找不到答案,我建议你还是重新连接吧··,一定要确定连接体系没问题,确保连接效率,后边的问题就相应的少很多了,祝好运!
一路前行!
14楼2010-03-30 15:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yet

铜虫 (小有名气)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by huangdi07 at 2010-03-30 14:32:14:
我最近进行测序了 发现Hind III 酶切位点发生了突变 但是用Hind III做单酶切时为什么能切开呢

不要问那么多为什么,能做出来就行。
如果HindIII能切开的话,说明你另一个酶没有切开,建议加大酶量再切!
15楼2010-03-30 20:31:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
我也遇到同样的问题。。。
16楼2010-03-30 21:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

angel2536

金虫 (著名写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
验证使从质粒上进行PCR吧,理应是连接上了。
不知单酶切是否完全切开,是不是酶活性不行了?
按你说的,第二种方案已经可行了,单还是没切出就不应该了。。。。
17楼2010-03-31 10:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王庭

木虫 (著名写手)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
会不会是两种酶所需活性条件差别大啊,这样就导致只有单酶起明显的作用
努力做最好的自己!!
18楼2010-03-31 10:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

十二1130

银虫 (小有名气)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
我也遇到了同样的问题,双酶切之后目的条带根本就看不到
19楼2010-03-31 14:25:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

acaifeng

银虫 (初入文坛)


huangdi07(金币+1):谢谢参与
测序来的比较直接
20楼2010-03-31 14:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huangdi07 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程调剂289 +41 yang婷 2026-04-07 47/2350 2026-04-09 23:23 by wolf97
[考研] 江苏大学 工科调剂 捡漏 +3 Evan_Liu 2026-04-09 4/200 2026-04-09 22:52 by yang婷
[考研] 086003调剂求助 +19 苏弋万 2026-04-09 20/1000 2026-04-09 20:48 by bljnqdcc
[考研] 332,085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 293求调剂 +3 勇远库爱314 2026-04-08 3/150 2026-04-09 15:51 by wp06
[考研] 368化学求调剂 +13 wwwwabcde 2026-04-07 14/700 2026-04-09 14:47 by heaven_jay
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +8 bradoner 2026-04-08 9/450 2026-04-09 13:43 by only周
[考研] 一志愿南昌大学,085600,344分求调剂 +11 调剂上岸玘 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:17 by luoyongfeng
[考研] 304求调剂 +16 c297914 2026-04-05 17/850 2026-04-08 13:00 by grayjzr
[考研] 一志愿生物与医药,296分,求调剂 +14 66鹿 2026-04-03 16/800 2026-04-08 10:38 by tjzhao
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 334分控制工程求调剂 +4 姜尚真sadasd 2026-04-03 4/200 2026-04-07 09:26 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +4 电气小神童 2026-04-04 6/300 2026-04-07 00:14 by guanxin1001
[考研] 331求调剂 +8 于征yz 2026-04-05 8/400 2026-04-06 00:54 by fmesaito
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
信息提示
请填处理意见