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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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z320m320

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR产物连接不上,没法测序

我的目的片段大小3kb左右,提取全基因PCR得到产物纯化,开始用的TaKaRa
的pMD19-T 连了八次没连接上,现在又换了Transgen 的pEASY-T3 做了一次也没连上,我现在很迷惑,恳请高手指点迷津,谢谢!
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biodadiao

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该不会吧,一般AT克隆,只要PCR产物纯化后,16度连接30min就可以了,若实在连不上的话,可以将PCR产物添加dATP反应一会时间,效果会更好。

提醒一下,你的PCR实用的是Taq酶吧,不是pfu吧?
9楼2010-03-15 16:40:53
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-03-15 11:22
确定P出来了吗?试一下直接用P出来的产物加乙醇沉淀、溶解,再连一下。
2楼2010-03-15 10:24:19
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tracy007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是酶切的不好呢
3楼2010-03-15 10:27:14
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z320m320

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by z320m320 at 2010-03-15 10:13:09:
我的目的片段大小3kb左右,提取全基因PCR得到产物纯化,开始用的TaKaRa
的pMD19-T 连了八次没连接上,现在又换了Transgen 的pEASY-T3 做了一次也没连上,我现在很迷惑,恳请高手指点迷津,谢谢!

p出来了,条带很清晰,就是连不上
4楼2010-03-15 10:32:55
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