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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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chchy2085

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】PCR问题

急切求助大家
我的问题是这样的:我在一个嵌合抗体细胞株中提取轻链基因,年前已经弄出来了,因为我要和重链做重叠pcr,所以回收的轻链基因用完了,这个学期开学后又重新调了一次轻链的基因也用完了,然后我在弄,在也弄不出来了,我抽RNA,然后RT-PCR,得到cDNA,在PCR,电泳后,可以得到目的条带,但是很暗,可是当我在以PCR产物为模板进行二次PCR的时候却再也p不出来了,不知道是什么原因啊,试剂条件都没有变,我已经弄了很长时间了,望各位兄弟姐妹们给点建议,衷心感谢!
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qqsvery

木虫 (著名写手)

chchy2085(金币+5): 2010-03-18 14:29
“再PCR,电泳后,可以得到目的条带,但是很暗”

从这步起,你割胶回收纯化目的片段,然后进行二次PCR,做电泳检测,试试看吧!
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
2楼2010-03-16 19:29:19
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silicare

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chchy2085(金币+5): 2010-03-18 14:29
优化pcr条件
3楼2010-03-17 09:36:39
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jzhyang

铜虫 (小有名气)

chchy2085(金币+3): 2010-03-22 13:36
Pcr体系有问题,看看是酶还是buffer哪个环节
4楼2010-03-21 21:08:11
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