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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】酶活测定

测定酶活实验中要求“以每分钟催化1微摩尔底物转化为产物的酶量定义为一个酶活力单位(U )”。

该实验是通过测定吸光度变化值来计算酶活的,“每分钟催化1微摩尔底物”是吸光度变化多少?具体是怎么计算酶活的?

谢谢!!!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)


1949stone(金币+1): 2010-03-13 12:57
不同的酶不一样的
2楼2010-03-13 09:50:58
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mxbeaver

木虫 (著名写手)

浪滔滔~人渺渺~

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-13 12:57
楼主测的是什么酶?可以用产物的标准品制作标准曲线,浓度为横坐标,不同产物浓度所对应的OD值为纵坐标。
3楼2010-03-13 09:55:53
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by mxbeaver at 2010-03-13 09:55:53:
楼主测的是什么酶?可以用产物的标准品制作标准曲线,浓度为横坐标,不同产物浓度所对应的OD值为纵坐标。

是葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

好像酶活都是以一分钟内吸光度变化一定值来计算的吧?那么这个酶活应该按吸光度变化多少计算啊?
4楼2010-03-13 10:04:37
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

应该制作标准曲线的!
倚楼听风雨,淡看江湖路!
5楼2010-03-13 13:28:50
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我测过H6PDH的活性,方法是通过测NADPH的生成量来间接说明酶的活性,具体方法是在细胞或者微粒体中加入底物G6P和NADP,反应30min,中间每5min测一次340nm处的吸光值,最后按每分钟每毫克蛋白产生多少nmol的NADPH来表示酶活性的大小。楼主也可以这个方法测G6PDH的活性,祝成功!
6楼2010-03-13 14:03:29
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)


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补充楼上MM,吸光度的问题是吸光光度值在0.2-0.8之间的变化值之差。
将有能量帮助他人作为自己的人生追求!
7楼2010-03-13 23:06:17
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tjkdcl

铁杆木虫 (著名写手)


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看你是什么酶了,先做标准曲线,然后计算,测OD时,最好控制在0.2-0.8之间
有志者事竟成!
8楼2010-03-15 15:24:45
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