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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶活测定
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】酶活测定

测定酶活实验中要求“以每分钟催化1微摩尔底物转化为产物的酶量定义为一个酶活力单位(U )”。

该实验是通过测定吸光度变化值来计算酶活的，“每分钟催化1微摩尔底物”是吸光度变化多少？具体是怎么计算酶活的？

谢谢！！！
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1楼 2010-03-13 09:41:11
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1): 2010-03-13 12:57
不同的酶不一样的
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2楼2010-03-13 09:50:58
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mxbeaver

木虫 (著名写手)

浪滔滔~人渺渺~
★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-03-13 12:57
楼主测的是什么酶？可以用产物的标准品制作标准曲线，浓度为横坐标，不同产物浓度所对应的OD值为纵坐标。
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3楼2010-03-13 09:55:53
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by mxbeaver at 2010-03-13 09:55:53:
楼主测的是什么酶？可以用产物的标准品制作标准曲线，浓度为横坐标，不同产物浓度所对应的OD值为纵坐标。

是葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

好像酶活都是以一分钟内吸光度变化一定值来计算的吧？那么这个酶活应该按吸光度变化多少计算啊？
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4楼2010-03-13 10:04:37
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
应该制作标准曲线的！
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倚楼听风雨，淡看江湖路！
5楼2010-03-13 13:28:50
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)
★
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我测过H6PDH的活性，方法是通过测NADPH的生成量来间接说明酶的活性，具体方法是在细胞或者微粒体中加入底物G6P和NADP，反应30min，中间每5min测一次340nm处的吸光值，最后按每分钟每毫克蛋白产生多少nmol的NADPH来表示酶活性的大小。楼主也可以这个方法测G6PDH的活性，祝成功！
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6楼2010-03-13 14:03:29
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
补充楼上MM，吸光度的问题是吸光光度值在0.2-0.8之间的变化值之差。
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
7楼2010-03-13 23:06:17
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tjkdcl

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你是什么酶了，先做标准曲线，然后计算，测OD时，最好控制在0.2-0.8之间
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有志者事竟成！
8楼2010-03-15 15:24:45
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