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【求助/交流】DNA加减法测序
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昨天看了DNA SANGER测序，有些东西不是很明白，加法的时候只加一种核苷酸，DNA聚合酶外切3‘——5’，而减法时只少一种核苷酸DNA聚合酶确是聚合活性，这是为什么？ 还有加法是外切切到DNA链上与所加的核苷酸相同时停止，这又是为什么啊？ 请高手给以解答 |
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加法时，比如只加入dATP，本来加入了3′→5外切酶就会沿3′端逐个切掉，但是由于加入了dATP，显然遇到dA的位置降解反应就停止了， 减法则是加入三种dNTP,聚合反应的时候，比如不加dATP,那遇到与它配对的碱基时，由于没有dATP那反应自然就终止了啊 加法系统实际就是以降解为条件，以DNA聚合酶的3′→5′的外切酶活性为基础，当降解过程遇到试剂中所富含的dNTP时，反应就停止。按理只用一个加法系统就足以推断DNA的碱基序列了。但由于技术上的原因，只用一种方法有时不能得到完全正确的结果，因此又设计了一种减法系统。 |
2楼2010-03-12 18:51:18