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sarahliu2009

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒摩尔浓度

用T4 ligase连接双酶切质粒和双酶切核苷酸片段时, 应该控制两者的摩尔比例, 质粒的质量浓度可以用电泳和紫外得到, 但是摩尔浓度如何计算? 谢谢大家.
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

看碱基数就可以了。

★ ★ ★
sarahliu2009(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2): 2010-03-12 09:24
假设质粒100ng/ul,外源片段10ng/ul,质粒大小3500bp,外源片段1500bp。那么连接体系就可以这样算:质粒的量/片段的量=1/3 =A;质粒的分子量/片段的分子量=3500/1500=B;质粒浓度/外源片段浓度=100/10=C;则连接体系所加的质粒体积/片段体积=AB/C=7/90。然后按照连接要求加入适当的量就可以了。 可以根据说明书的要求按照这个算法算出应加的量,也就是体积。

[ Last edited by wjswj on 2010-3-12 at 08:53 ]
金币是赌出来的
4楼2010-03-12 08:51:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
sarahliu2009(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1):我也是 2010-03-12 09:24
sarahliu2009(金币+1): 2010-03-15 13:05
我一般是根据二者电泳的亮度来大致估计下。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-03-12 08:44:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
sarahliu2009(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-03-12 09:24
PCR回收后可以定量,质粒我习惯一开始酶切的时候就可以获知加了多少了,然后估算一下损失率
3楼2010-03-12 08:46:43
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van0735

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★
sarahliu2009(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2): 2010-03-12 09:24
核酸摩尔数与质量的换算:
1 μg 1,000bp DNA = 1.52 pmol
例如:1 μg pUC18/19 DNA (2,688bp) = 0.57 pmol
如果知道质粒的大小就能算出浓度了
5楼2010-03-12 09:13:15
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