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yiran8858

铜虫 (小有名气)

[交流] 苯酚-硫酸法测定多糖

这几天我在用紫外分光光度计测多糖的含量,苯酚-硫酸法
分别用移液管精密移取0.2/0.4/0.6/0.8/1.0ml  0.1mg/ml的葡萄糖对照品溶液于具塞试管中,用水加至2ml,加入1ml5%苯酚,摇匀(摇一会儿),再加入5ml硫酸,摇匀,放沸水中15min,取出,迅速冰水冷却,测吸光度。可是我做了好几次,都很不稳定,无法得到标准,请专家赐教!万分感谢!

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我喜欢,我加油
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洒脱ing

木虫 (正式写手)

yiran8858(金币+1):谢谢你的回答,我现配的苯酚溶液,不过我不确定苯酚是不是纯的,呵呵,紫外也没有问题,我打算再用蒽酮试试 2010-03-21 21:56
yiran8858(金币+1, 博学EPI+1):谢谢,我现在改用蒽酮法测了,还比较稳定,可能是我的苯酚出的问题吧。 2010-04-17 10:27
你用的苯酚溶液是配置多长时间的啊?会不会失效了呢?还有,加入苯酚溶液摇匀后迅速加入浓硫酸。
分光光度计在使用前预热了吗?
我只想到这些问题,我做的时间也是这样的啊,不过标曲也得出来了啊。
2楼2010-03-15 20:35:50
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shunfengfan

金虫 (正式写手)

“葡萄糖对照品溶液于具塞试管中,用水加至2ml“,我感觉应该是量取不准确吧   我做的时候是先取0.1//0.2/0.4....用容量瓶定容,再取2ml,比较准确。
3楼2010-04-14 22:16:34
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shui_hanliu

金虫 (正式写手)

分别取0μg•mL-1、20μg•mL-1、40μg•mL-1、60μg•mL-1、80μg•mL-1、100μg•mL-1的葡萄糖标准溶液1ml于试管中,再向每管中加入5%苯酚溶液1mL,快速加入浓硫酸5mL,摇匀,40℃水浴30min,之后用流水速冷至室温。于最大吸光度的波长下,测定各个试管中溶液的吸光度,以吸光度值为横坐标,为糖含量纵坐标绘制标准曲线。
这个是我做过的,你还可以
把苯酚和硫酸按比例混好,在分别加入到各个糖浓度的体系中,加热后再测
4楼2010-04-15 08:24:09
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搞笑冒冒

金虫 (正式写手)

我师兄告诉我这个方法测定多糖,加入硫酸后需要充分摇匀,摇晃的效果直接影响测定结果,不知道是不是这个问题?我测定的时候还是很稳定的!
心中有太阳~~~
5楼2010-04-15 16:00:02
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