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yiran8858

铜虫 (小有名气)

[交流] 苯酚-硫酸法测定多糖

这几天我在用紫外分光光度计测多糖的含量，苯酚-硫酸法
分别用移液管精密移取0.2/0.4/0.6/0.8/1.0ml  0.1mg/ml的葡萄糖对照品溶液于具塞试管中，用水加至2ml，加入1ml5%苯酚，摇匀（摇一会儿），再加入5ml硫酸，摇匀，放沸水中15min，取出，迅速冰水冷却，测吸光度。可是我做了好几次，都很不稳定，无法得到标准，请专家赐教！万分感谢！
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我喜欢，我加油
1楼 2010-03-11 22:18:10
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洒脱ing

木虫 (正式写手)
yiran8858(金币+1):谢谢你的回答,我现配的苯酚溶液,不过我不确定苯酚是不是纯的,呵呵,紫外也没有问题,我打算再用蒽酮试试 2010-03-21 21:56
yiran8858(金币+1, 博学EPI+1):谢谢，我现在改用蒽酮法测了，还比较稳定，可能是我的苯酚出的问题吧。 2010-04-17 10:27
你用的苯酚溶液是配置多长时间的啊？会不会失效了呢？还有，加入苯酚溶液摇匀后迅速加入浓硫酸。
分光光度计在使用前预热了吗？
我只想到这些问题，我做的时间也是这样的啊，不过标曲也得出来了啊。
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2楼2010-03-15 20:35:50
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shunfengfan

金虫 (正式写手)
“葡萄糖对照品溶液于具塞试管中，用水加至2ml“，我感觉应该是量取不准确吧   我做的时候是先取0.1//0.2/0.4....用容量瓶定容，再取2ml，比较准确。
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3楼2010-04-14 22:16:34
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shui_hanliu

金虫 (正式写手)
分别取0μg•mL-1、20μg•mL-1、40μg•mL-1、60μg•mL-1、80μg•mL-1、100μg•mL-1的葡萄糖标准溶液1ml于试管中，再向每管中加入5%苯酚溶液1mL，快速加入浓硫酸5mL，摇匀，40℃水浴30min，之后用流水速冷至室温。于最大吸光度的波长下，测定各个试管中溶液的吸光度，以吸光度值为横坐标，为糖含量纵坐标绘制标准曲线。
这个是我做过的，你还可以
把苯酚和硫酸按比例混好，在分别加入到各个糖浓度的体系中，加热后再测
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4楼2010-04-15 08:24:09
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搞笑冒冒

金虫 (正式写手)
我师兄告诉我这个方法测定多糖，加入硫酸后需要充分摇匀，摇晃的效果直接影响测定结果，不知道是不是这个问题？我测定的时候还是很稳定的！
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心中有太阳~~~
5楼2010-04-15 16:00:02
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