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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 【讨论】新手求助co-ip的一个问题
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古韵清音

银虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】新手求助co-ip的一个问题

最近在跟着师兄学co-ip，师兄一再嘱咐我加beeds和抗体的时候要特别小心，因为没有办法控制上样量，因此只能凭自己感觉尽量使上样量一致。我就想，可不可以在上样之前先测定蛋白质浓度呢，因为我们将蛋白样品从beeds上煮下来的时候loading buffer 里已经有溴酚蓝了，所以不可能煮下来之后测定，那么既然溴酚蓝不是影响将样品从beeds上煮下来的因素，那么可不可以先就用水或某种无色缓冲液将样品煮下来，测定浓度后再加溴酚蓝继续处理呢？但是又考虑到煮过后蛋白质变性了是不是不能测定，所以来这里请教下各位师兄师姐，谢谢大家~
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1楼 2010-03-11 22:07:04
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77747759

金虫 (正式写手)

与国同庆
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
只要在上样缓冲液中不加溴酚蓝就可以了，溴酚蓝本身只是颜色的指示剂而已，再者我们跑的电泳本身就是蛋白质变性电泳，最担心的是，反复煮蛋白会是蛋白降解。co—ip要保证上样量一致，主要是在裂解细胞的量，裂解液的量，beads的量，及抗体的量上做文章，一般只要保证他们一致，基本蛋白上样量一致。
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2楼2010-03-15 21:52:55
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