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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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古韵清音

银虫 (小有名气)

[交流] 【讨论】新手求助co-ip的一个问题

最近在跟着师兄学co-ip,师兄一再嘱咐我加beeds和抗体的时候要特别小心,因为没有办法控制上样量,因此只能凭自己感觉尽量使上样量一致。我就想,可不可以在上样之前先测定蛋白质浓度呢,因为我们将蛋白样品从beeds上煮下来的时候loading buffer 里已经有溴酚蓝了,所以不可能煮下来之后测定,那么既然溴酚蓝不是影响将样品从beeds上煮下来的因素,那么可不可以先就用水或某种无色缓冲液将样品煮下来,测定浓度后再加溴酚蓝继续处理呢?但是又考虑到煮过后蛋白质变性了是不是不能测定,所以来这里请教下各位师兄师姐,谢谢大家~
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77747759

金虫 (正式写手)

与国同庆


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只要在上样缓冲液中不加溴酚蓝就可以了,溴酚蓝本身只是颜色的指示剂而已,再者我们跑的电泳本身就是蛋白质变性电泳,最担心的是,反复煮蛋白会是蛋白降解。co—ip要保证上样量一致,主要是在裂解细胞的量,裂解液的量,beads的量,及抗体的量上做文章,一般只要保证他们一致,基本蛋白上样量一致。
2楼2010-03-15 21:52:55
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