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【求助】流动相添加法分离苯基琥珀酸对映体的问题 已有1人参与
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请教一下:HPLC分离苯基琥珀酸外消旋体,流动相为:10mmol/l羟丙基β环糊精,20%乙腈,0.05%三氟乙酸,用三乙胺调pH=2.5,柱温35度,流速0.6ml/min,波长225nm,色谱柱为YMC的ODS C18(250*5)。由于实验的需要,苯基琥珀酸样品的配制是这样的:5mg样品溶于20ml含有0.05mol/l的羟丙基β环糊精水溶液中,且该水溶液为0.1mol/l的磷酸盐缓冲液。需要测定这个样品中的R,S对映体HPLC分离情况。 结果对映体拆分效果较好(R保留时间短于S),但碰到一个现象,想不通:R的峰高要低于S峰高,且峰面积要少于S的面积,进了好几针都这样。这是为什么?照道理两个峰面积应该一样的啊,而且先出峰的R峰高应该高于S的。 若把样品溶解在甲醇中,就没有上述现象。RS峰面积一致,峰高也正常。 这是为什么啊? |
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