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【求助】流动相添加法分离苯基琥珀酸对映体的问题 已有1人参与
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请教一下：HPLC分离苯基琥珀酸外消旋体，流动相为：10mmol/l羟丙基β环糊精，20%乙腈，0.05%三氟乙酸，用三乙胺调pH=2.5，柱温35度，流速0.6ml/min，波长225nm，色谱柱为YMC的ODS C18（250*5）。由于实验的需要，苯基琥珀酸样品的配制是这样的：5mg样品溶于20ml含有0.05mol/l的羟丙基β环糊精水溶液中，且该水溶液为0.1mol/l的磷酸盐缓冲液。需要测定这个样品中的R,S对映体HPLC分离情况。 结果对映体拆分效果较好（R保留时间短于S），但碰到一个现象，想不通：R的峰高要低于S峰高，且峰面积要少于S的面积，进了好几针都这样。这是为什么？照道理两个峰面积应该一样的啊，而且先出峰的R峰高应该高于S的。 若把样品溶解在甲醇中，就没有上述现象。RS峰面积一致，峰高也正常。 这是为什么啊？ |
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