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gydgs033

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物设计与PCR产物相关性

请教pcr高手啊
1)我现在用ABI公司primer express2.0设计引物,探针。
不知为何设计出的上下游引物加上探针的长度,居然和目的产物相差无几。
会有这种情况出现么?如果这样,我想就不必非得用什么高保真酶什么了吧,总共才差几个碱基,感到非常困惑,请假达人指点啊
2)荧光定量pcr产物一般多长啊
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

gydgs033(金币+1): 2010-03-15 20:48
也就是说你目的产物也就几十bp,好像太短了点,没做过这么短的,一般100bp往上吧,不用太长
2楼2010-03-06 21:47:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

gydgs033(金币+2): 2010-03-15 20:48
最近又研究了一下,一般也就是50-150bp,所以你的产物比较短,很正常,大可以放心。一般跑real-time PCR用得起探针的,都用高保真酶,没多少钱啊
3楼2010-03-11 15:51:09
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

gydgs033(金币+1): 2010-03-15 20:48
保真度和特异度没有任何相关性
做qPCR最好就是普通Taq,扩增能力强
4楼2010-03-11 18:44:29
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

我们都是买的takara的专门real-time PCR ExTaq酶
5楼2010-03-15 21:52:31
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

你把基因序列号发给上海生工,免费帮你设计的,邮箱是primer@sangon.com.发邮件后一天就会有回应,不用打电话。然后你下载他们公司的引物合成申请表,把它设计的序列填上,发他们指定的另外一个邮箱,就OK了,扩的出来的
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
6楼2010-03-16 19:11:20
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

gydgs033(金币+1): 2010-03-16 19:36
你就注明要合成realtime引物,他们是专业的
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
7楼2010-03-16 19:14:55
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