| 查看: 716 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 xiangao 的 5 个金币 | |||
xiangao金虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】枯草芽孢杆菌WB800感受态的制备
|
||
|
请大家发我一份B.subtilis WB800感受态的制备方法，我现在转化效率很低。 谢谢帮忙！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有138人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
xiangao
金虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1375.1
- 散金: 268
- 红花: 2
- 帖子: 434
- 在线: 310.9小时
- 虫号: 679064
- 注册: 2008-12-21
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
2楼2010-03-06 16:47:18
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 15960
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 1897
- 在线: 87.6小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
xiangao(金币+5):谢谢应助 2010-03-06 19:05
|
于第一天上午取一满环枯草芽孢杆菌甘油菌划LB平板，37℃培养箱培养12h。挑单菌落至3ml LB培养基中，37℃， 250 rmin培养过夜。第二天上午取160 μl培养液转接至8 ml SPI培养基中，37℃，250 rmin培养至对数生长末期 (约4~5 h)，取0.2 ml培养液至2 ml SPII培养基中，37℃，100 rmin培养90 min ，加入20ul 10mmolL EGTA，再于37℃，100 rmin培养10分钟。分装成0.5 ml每管，各加入5ul DNA，再于37℃，250rmin培养90分钟，取菌液涂布筛选平板。 试剂： SP盐：0.2%（NH4）2SO4, 1.4%K2HPO4, 0.6%KH2PO4, 0.02%MgSO4•7H2O, 0.1%柠檬酸钠； SPⅠ培养基：SP盐溶液加入1%体积浓度为50%葡萄糖溶液，1%体积100×CAYE溶液； SPⅡ培养基：SPⅠ培养基加入1%体积50mmol/LCaCl2溶液，1%体积250mmol/L MgCl2溶液。 SP－A Salts Solution：（500 ml Solution） 0.4％ (NH4)2SO4 2g 2.8% K2HPO4•3H2O 14g 1.2% KH2PO4 6g 0.2% Trisodium Citrate Dihydrate 1g 121℃灭菌20min SP－B Salts Solution：（500 ml Solution） 0.04% MgSO4•7H2O 0.2g 121℃灭菌20min 100× CAYE Solution：（100 ml Solution） 2％ Casamino acid 2g 10％ Yeast Extract 10g 121℃灭菌20min SPI Medium：（20 mL） 9.8mL SP－A Salts Solution 9.8mL SP－B Salts Solution 200µL （1％V）Glucose（50％w/v，115℃灭菌20min） 200µL （1％V）100× CAYE SPII Medium：（6 mL） 5.88mL SPI Medium 60µL （1％V）50mM CaCl2 60µL （1％V）250mM MgCl2 100×EGTA Solution： 10mmol／L EGTA 溶液，溶解时需加少量NaOH至pH8.0 |
3楼2010-03-06 17:06:49
