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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】切胶回收产物克隆后目的片段大小不对
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 yujiaping1 的 3 个金币

yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】切胶回收产物克隆后目的片段大小不对

非常奇怪的现象，我都是将PCR产物电泳后切胶回收目的条带，之后检测回收效果，然后进行克隆的，结果质粒回收后酶切发现，有的时候克隆片段的大小和根本不是目的片段的大小，我想知道，这些片段是哪来的。今天遇到的情况更可怕，所以克隆全部不含有目的片段，目的片段在1500bp左右，而回收的片段多数在500bp一下，太奇怪了，这些小片段是哪来的？
有发现类似现象的虫友吗？谁能给我个合理的解释。
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1楼 2010-03-04 11:34:55
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pwj

银虫 (小有名气)
建议好好看下你的目的片段和载体上的酶切位点！
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2楼2010-03-04 12:00:19
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by pwj at 2010-03-04 12:00:19:
建议好好看下你的目的片段和载体上的酶切位点！

我就是使用EcoRI酶切的，载体是PGEM T-easy，很多情况是没有问题的，我说的是特殊情况
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3楼2010-03-04 12:36:17
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sailormoon8623

酶切位点
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4楼2010-03-04 16:57:01
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85715623

木虫 (正式写手)
yujiaping1(金币+1): 2010-03-05 10:48
是不是目的基因G+C含量较高的原因啊。
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5楼2010-03-04 17:06:40
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 85715623 at 2010-03-04 17:06:40:
是不是目的基因G+C含量较高的原因啊。

为什么GC含量较高就会出现这种现象？能说详细点吗？
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6楼2010-03-04 17:17:59
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
yujiaping1(金币+1): 2010-03-05 10:48
目的片段被切了
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7楼2010-03-04 18:59:35
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yzhang1986 at 2010-03-04 18:59:35:
目的片段被切了

目的片段被切也不大可能，我用PCR也检测过，结果和酶切结果一样，就是片段变小了，很奇怪，怎么连上小片段的，真是不明原因
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8楼2010-03-05 10:48:00
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