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yujiaping1

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】切胶回收产物克隆后目的片段大小不对

非常奇怪的现象,我都是将PCR产物电泳后切胶回收目的条带,之后检测回收效果,然后进行克隆的,结果质粒回收后酶切发现,有的时候克隆片段的大小和根本不是目的片段的大小,我想知道,这些片段是哪来的。今天遇到的情况更可怕,所以克隆全部不含有目的片段,目的片段在1500bp左右,而回收的片段多数在500bp一下,太奇怪了,这些小片段是哪来的?
有发现类似现象的虫友吗?谁能给我个合理的解释。
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pwj

银虫 (小有名气)

建议好好看下你的目的片段和载体上的酶切位点!
2楼2010-03-04 12:00:19
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by pwj at 2010-03-04 12:00:19:
建议好好看下你的目的片段和载体上的酶切位点!

我就是使用EcoRI酶切的,载体是PGEM T-easy,很多情况是没有问题的,我说的是特殊情况
3楼2010-03-04 12:36:17
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sailormoon8623

酶切位点
4楼2010-03-04 16:57:01
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85715623

木虫 (正式写手)

yujiaping1(金币+1): 2010-03-05 10:48
是不是目的基因G+C含量较高的原因啊。
5楼2010-03-04 17:06:40
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 85715623 at 2010-03-04 17:06:40:
是不是目的基因G+C含量较高的原因啊。

为什么GC含量较高就会出现这种现象?能说详细点吗?
6楼2010-03-04 17:17:59
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

yujiaping1(金币+1): 2010-03-05 10:48
目的片段被切了
7楼2010-03-04 18:59:35
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by yzhang1986 at 2010-03-04 18:59:35:
目的片段被切了

目的片段被切也不大可能,我用PCR也检测过,结果和酶切结果一样,就是片段变小了,很奇怪,怎么连上小片段的,真是不明原因
8楼2010-03-05 10:48:00
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