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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA电泳

请高手指点RNA电泳中应该注意什么问题??

1、电泳槽如何处理?现在有人告诉我用0.1MNaOH和0.1EDTA混合液浸泡过夜,然后用DEPC水冲洗干净即可,这样可以吗?直接用0.1MNaOH浸泡过夜可以吗?

2、EB的天价问题??在跑电泳的时候,跑完后将胶浸入EB(不是DEPC水配置,双蒸水配置的)溶液中的话,RNA会不会降解啊?

3、凝胶本身会不会有RNase酶啊??会不会降解RNA啊?

4还有其他注意的问题吗??

谢谢,万分的!!!
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gaozx123

金虫 (小有名气)

pidou(金币+2):谢谢你哦,可否认识一下,将来长期联系,你是在北京吗? 2010-03-03 11:25
1.直接用0.1MNaOH浸泡过夜,然后用DEPC水冲洗干净即可.
2.这个会有很少量的降解。最多染10分钟,视情况而定吧,我们一般都将EB加到胶里面跑。跑完直接照相。
3.TAE缓冲液用DEPC水配制,瓶子要干烘或灭菌两次。制胶就用该缓冲液加到琼脂糖中。
4.电泳缓冲液也用DEPC水最好。
2楼2010-03-03 08:33:26
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jasco

木虫 (正式写手)

pidou(金币+1):谢谢你哦,可否认识一下,将来长期联系,你是在北京吗? 2010-03-03 11:26
如果要求不严格的话,可以不用处理,跟跑dna胶一样,
3楼2010-03-03 08:43:20
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pidou

木虫 (正式写手)

如果还有的虫友有好的建议的话,可以继续给加金币啊
4楼2010-03-03 11:26:35
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的方法,有点粗糙,但是简便易行,什么都不用处理,就是提高电压(通常最小的那种电泳槽180V,要是大电泳槽还可以提高),尽可能短时电泳,20分钟之内跑完,很少量的降解,不会影响RNA的观察。如果这么短时间内就降解,观察不到了,那说明你提的RNA也就不怎么样了。

相信我,屡试不爽
5楼2010-03-03 13:07:51
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