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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组DNA电泳和PCR酶问题
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puyoung

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因组DNA电泳和PCR酶问题

各位高手，小弟刚刚进实验室，想请教一个问题，我刚从人外周血提取到了基因组DNA，打算做一个电泳跑胶看看。应该加DNA多大的量，胶用多大的浓度，跑多长时间，如何判断结果等，注意事项有哪些~~~

另外，小弟打算做克隆，从基因组提的DNA，PCR是不是应该选择高保真的酶，Pfu？kod?有没有推荐的牌子，那个型号？

再次感谢各位了~~~~
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1楼 2010-03-01 22:30:23
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puyoung

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-03-01 23:12:43:
克隆级的酶当然要高保真，Pfu、KOD都是高保真的，以及Pfx之类的
当然扩增效率会次一点，如果基因不是很长推荐Taq和Pfu的混合酶

怎么提的DNA？试剂盒的话就不用跑电泳了，一般都没问题的

长度是577和1250的，Taq和Pfu的混合酶？是指直接有混好的吗？什么牌子会好一些呢？

DNA是用自己配的溶液提的，纯手工~~
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3楼2010-03-01 23:23:45
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
克隆级的酶当然要高保真，Pfu、KOD都是高保真的，以及Pfx之类的
当然扩增效率会次一点，如果基因不是很长推荐Taq和Pfu的混合酶

怎么提的DNA？试剂盒的话就不用跑电泳了，一般都没问题的
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2楼2010-03-01 23:12:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不算长，Taq都可以扩，这种长度我喜欢用Invitrogen的Platinum Taq，具有6倍保真性，你可以找代理商买国内分装的那种，价格便宜不少，用这个酶我就还没试过没扩出来的

手工的话，那就配个0.8%的胶，然后随便跑跑吧，二甲苯青能够进胶两三cm就可以停了。毕竟你要扩的片段不长。可以用1kb ladder做marker
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4楼2010-03-01 23:53:25
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