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puyoung

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因组DNA电泳和PCR酶问题

各位高手,小弟刚刚进实验室,想请教一个问题,我刚从人外周血提取到了基因组DNA,打算做一个电泳跑胶看看。应该加DNA多大的量,胶用多大的浓度,跑多长时间,如何判断结果等,注意事项有哪些~~~

另外,小弟打算做克隆,从基因组提的DNA,PCR是不是应该选择高保真的酶,Pfu?kod?有没有推荐的牌子,那个型号?

再次感谢各位了~~~~
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
克隆级的酶当然要高保真,Pfu、KOD都是高保真的,以及Pfx之类的
当然扩增效率会次一点,如果基因不是很长推荐Taq和Pfu的混合酶

怎么提的DNA?试剂盒的话就不用跑电泳了,一般都没问题的
2楼2010-03-01 23:12:43
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puyoung

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-03-01 23:12:43:
克隆级的酶当然要高保真,Pfu、KOD都是高保真的,以及Pfx之类的
当然扩增效率会次一点,如果基因不是很长推荐Taq和Pfu的混合酶

怎么提的DNA?试剂盒的话就不用跑电泳了,一般都没问题的

长度是577和1250的,Taq和Pfu的混合酶?是指直接有混好的吗?什么牌子会好一些呢?

DNA是用自己配的溶液提的,纯手工~~
3楼2010-03-01 23:23:45
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不算长,Taq都可以扩,这种长度我喜欢用Invitrogen的Platinum Taq,具有6倍保真性,你可以找代理商买国内分装的那种,价格便宜不少,用这个酶我就还没试过没扩出来的

手工的话,那就配个0.8%的胶,然后随便跑跑吧,二甲苯青能够进胶两三cm就可以停了。毕竟你要扩的片段不长。可以用1kb ladder做marker
4楼2010-03-01 23:53:25
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