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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr引物设计

想扩增一段已知序列基因,设计的引物必须与母链3‘端末尾互补吗,可以往中间靠点吗?往中间靠的话会影响扩增的目的序列的长度吗,谢谢
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果你要扩增基因的全部长度,则引物必须在末端,否则扩增片段只是基因的一部分。3‘末端必须与序列一致。
2楼2010-03-01 14:41:35
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jackiechan

木虫 (小有名气)

是3‘末端还 是5‘末端必须与序列一致?我觉得是引物的5‘末端必须与已知序列互补吧,扩增是5端到3端啊
3楼2010-03-01 14:51:25
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
目的片段的长度当然是由你的引物觉得的了

但究竟需要多长还得看你的实验目的

若是克隆基因用于表达,则一个碱基都不能少

若是检测基因的表达情况,比如realtime,则只需要其中的一部分就可以,甚至100bp
4楼2010-03-01 16:30:28
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jackiechan

木虫 (小有名气)

谢谢hyde0706 和silicare
5楼2010-03-01 19:46:57
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