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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr引物设计
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jackiechan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr引物设计

想扩增一段已知序列基因,设计的引物必须与母链3‘端末尾互补吗,可以往中间靠点吗?往中间靠的话会影响扩增的目的序列的长度吗,谢谢
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1楼 2010-03-01 14:33:13
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你要扩增基因的全部长度，则引物必须在末端，否则扩增片段只是基因的一部分。3‘末端必须与序列一致。
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2楼2010-03-01 14:41:35
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jackiechan

木虫 (小有名气)
是3‘末端还 是5‘末端必须与序列一致?我觉得是引物的5‘末端必须与已知序列互补吧,扩增是5端到3端啊
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3楼2010-03-01 14:51:25
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
目的片段的长度当然是由你的引物觉得的了

但究竟需要多长还得看你的实验目的

若是克隆基因用于表达，则一个碱基都不能少

若是检测基因的表达情况，比如realtime，则只需要其中的一部分就可以，甚至100bp
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4楼2010-03-01 16:30:28
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jackiechan

木虫 (小有名气)
谢谢hyde0706 和silicare
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5楼2010-03-01 19:46:57
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