24小时热门版块排行榜    

查看: 491  |  回复: 4
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 crab1983 的 1 个金币

crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请大家帮帮忙,我的TA克隆不长菌

请教大家一个问题,我将PCR产物交回收后连到T载体上(pMD18T),然后转化到JM109感受态细胞中,过夜培养但是一直不长菌,我用的就是普通的rTAG酶,不知道是什么原因就是不长菌,请大家帮帮忙!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)


amisking(金币+1): 2010-02-07 12:50
最常见的原因有
感受态不好
抗生素加错

拿个质粒当阳性对照
2楼2010-02-07 11:13:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5): 2010-02-07 12:50
首先考虑的是培养基没有问题吧,再次考虑的是感受态可能有问题,用质粒做个阳性对照看看,如果阳性对照没问题(满板白色单菌落一般就可以),说明链接可能有问题,不知道你的连接插入片段有多大,如果1.5K之内,pMD18-T一般没有问题,我没有用这个载体连过很大的片段,较大的片段一般用Promega的pGEM-T载体了,连接也可以用Control DNA做阳性对照,连接试剂盒没有问题,看你的插入片段的长度和浓度以及和载体的比例!·
3楼2010-02-07 12:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

就是啊,拿对照说话。
金币是赌出来的
4楼2010-02-08 11:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydong1

铜虫 (小有名气)

crab1983(金币+1): 2010-04-09 14:47
首先,你带A尾的PCR产物放了多久?一般而言,带A尾的PCR产物尽可能在一两天内连接T载体,否则,A尾易脱落,导致连接失败。其次,要保证你所用的T载试剂盒有没有问题,之前你们实验室有没有人成功克隆过。第三,感受态的问题,做转化的时候用质粒做个对照,质粒记得要稀释哦
祝成功
5楼2010-02-08 14:25:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 crab1983 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 298求调剂 +5 上岸6666@ 2026-03-20 5/250 2026-03-22 15:46 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 【同济软件】软件(085405)考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
信息提示
请填处理意见